香豆素系广泛存在于植物中的天然分子。它具有良好的光物理性能,如荧光量子产率高、光稳定性好,发射波长易调控和生物相容性好等,因而被广泛地应用于荧光成像和检测领域。本论文基于经典的二乙氨基香豆素,通过对其结构进行优化和改造,设计合成了一系列结构新颖的生物活性硫（RSS）探针,并对探针的检测性能和应用做了深入探讨。具体研究内容包括:（1）由于多硫化氢诱导苯丙二硫酮合成的传统识别策略易受H₂S或生物硫醇的干扰,开发了一种基于多硫化氢诱导取代-环化串联反应的新型多硫化氢荧光探针,C-HPS。根据多硫化氢较其他活性硫物种（如硫化氢和生物硫醇）具有更强的亲核性,C-HPS引入弱离去基团对甲氧基苯酚,使亲核取代反应仅由多硫化氢引发。当发生亲核取代后,多硫键因稳定性低而释放出硫单质形成巯基。随后,巯基诱导发生分子内环化反应,最终形成共轭程度更大的化合物。C-HPS的体系加入多硫化氢后荧光在576 nm处显著增强（大约增强97倍）,且具有快速响应时间（6 min）和足够的灵敏度（LOD=20 n M）。此外,C-HPS实现MGC-803细胞内多硫化氢的可视化应用。（2）开发能同时以不同荧光信号区分硫化氢,多硫化氢和生物硫醇的单分子荧光探针,对于阐明硫化氢,多硫化氢和生物硫醇在生理活性中的复杂功能作用和相互作用具有重大意义,但却非常具有挑战性。基于于硫化氢、多硫化氢和生物硫醇具有不同的亲核性和空间距离,选择能构建三个反应位点的二乙氨基香豆素作为平台,并通过调整反应位点的电负性以控制各反应位点的反应性,首次报道了同时检测硫化氢、多硫化氢和生物硫醇的单分子荧光探针,MCP1。MCP1本身不发荧光,向体系中分别加入生物硫醇、硫化氢和多硫化氢后可分别诱导469 nm、508 nm和576 nm处发射强烈的荧光信号。此外,探针MCP1显示出良好的选择性和抗干扰性,在高生物硫醇背景浓度下能线性地检测硫化氢或多硫化氢。共定位成像测试表明探针主要聚集在细胞溶酶体。最后,利用该探针可成功地实现对细胞内源性产生的硫化氢和多硫化氢进行区分检测。（3）为了探究第二章中MCP1与硫化氢的反应机理,成功地分离了绿色荧光产物ND。通过NMR,HR-MS,FTIR,XRD等手段对ND进行结构表征,发现ND为一种新型的香豆素-萘啶结构。进一步优化合H₂S与MCP1的反应条件,可在水相条件下将ND的收率提高至97%。底物拓展实验表明,该反应具有较好的普适性,可合成系列具有不同电子给体的香豆素-萘啶染料。光谱测试表明,ND具有优异的光谱性能,如量子产率高（QY=0.508）、稳定性好,双光子性能优秀（91.908GM）等突出优点。同时,其结构上同时存在氨基和羧基,便于修饰和改造,因而具有广阔的生物应用前景。