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稳定表达野生型p53基因、tk1基因人骨肉瘤细胞株的建立与鉴定目的建立稳定表达外源性野生型p53基因、tk1基因的人骨肉瘤细胞(U-2 OS)株,为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤旁观者效应(bystander effect,BSE)中的协同作用提供体外实验模型建立与鉴定的方法。方法利用分子生物学基因克隆技术分别将人类野生型p53基因、tk1基因cDNA片段插入到表达载体pIRES-EGFP中,得到重组质粒pIRES-EGFP-p53和pIRES-EGFP-tk1,并通过PCR、酶切电泳等方法进行质粒鉴定;然后用重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,转化菌落经PCR扩增后,将提取的质粒DNA用lipofectamine2000脂质体介导的转染方法导入U-2 OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系。结果1.成功地构建出包含有野生型p53基因、tk1基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-p53和pIRES-EGFP-tk1,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计。2.成功将重组质粒pIRES-EGFP-p53和pIRES-EGFP-tk1分别或同时导入人骨肉瘤细胞株U-2 OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系,并将其分别命名为U-2-p53 OS、U-2-tk1 OS和U-2-p53-tk1 OS;同时将空白载体pIRES-EGFP以同样的转染方法导入U-2 OS细胞中作为阴性对照。结论利用基因转染技术,建立了稳定表达外源性野生型p53基因、tk1基因的人骨肉瘤细胞系,为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤旁观者效应中的协同作用奠定了基础。抑癌基因PTEN和p27在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义目的通过研究骨肉瘤组织中抑癌基因PTEN、p27的表达情况,探讨它们在骨肉瘤发生发展过程中的作用及临床意义。方法收集2003-01～2007-03间我院骨科收治的资料完整的35例骨肉瘤患者和15例骨纤维结构不良患者的病理标本和临床资料,运用免疫组化方法(SP法)检测PTEN、p27在以上病理标本中的表达情况,并与临床资料联系进行统计学分析。计数资料两组或多组样本率的比较采用χ~2检验或Fisher确切概率法,两因素相关性采用Spearman等级相关分析法,所有资料均经过SPSS13.0统计软件处理,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.PTEN在骨肉瘤组织中的阳性表达率低于骨纤维结构不良中的表达率(χ~2=5.510,P=0.019),其与组织分化程度呈正相关(χ~2=9.121,P=0.003),与患者临床分期呈负相关(χ~2=8.117,P=0.004),与组织病理分级等其余影响因素无关(P>0.05)。2.p27在骨肉瘤组织中的阳性表达率同样低于骨纤维结构不良中的表达率(χ~2=6.731,P=0.009),其与组织分化程度呈正相关(χ~2=3.998,P=0.046),与患者临床分期、组织病理分级呈负相关(χ~2=15.04,P=0.001;χ~2=4.496,P=0.034),与其余影响因素无关(P>0.05)。3.在骨肉瘤组织中PTEN、p27的表达无相关关系(r=0.097,P=0.581)。结论PTEN和p27与骨肉瘤的发生发展密切相关,临床上检测PTEN和p27的表达对于骨肉瘤的早期诊断具有重要意义。