肺动脉高压是一些心肺血管疾病最常见的并发症之一，尽管其发病机制尚未完全明确，但目前已知所有慢性肺高压的患者通常预后较差：均发生肺血管结构重建、右心室肥大。肺血管壁组成细胞异常肥大、增殖、迁移并伴有细胞外基质积聚增加是肺高压肺血管结构重建的特征性改变：非肌型动脉由于血管周细胞、中膜平滑肌细胞增殖、迁移，血管中膜增厚及新生内膜形成并伴有内皮形态和功能的异常，导致肺血管阻力增加、顺应性下降。 韧黏素(Tenascin-C，TN-C)是一种重要的大分子寡聚体细胞外基质糖蛋白，在维持组织再生和结构重建如胚胎发育、上皮一间充质相互作用、伤口愈合以及肿瘤发生等过程中表达，通过细胞表面受体参与细胞间信号转导，调节内皮细胞、平滑肌细胞的增殖、迁移、分化等活动，而在大多数成年组织中不表达。有研究显示在球囊损伤内膜剥脱动物模型的新生内膜和人类动脉粥样硬化斑块中均检测到TN表达，提示：TN参与了血管重建过程。 本研究观察野百合碱(monocrotaline,MCT)性肺高压大鼠肺血管结构变化特征，应用免疫组织化学染色、逆转率聚合酶联反应以及蛋白免疫印迹等现代分子生物学技术结合图像分析从蛋白质和mRNA水平观察大鼠肺高压形成过程中肺组织(肺动脉)中TN表达变化，探讨TN-C表达与血管结构重建、肺高压形成的关系。 第一部分 野百合碱肺动脉高压大鼠肺血管结构重建 目的 肺动脉高压是一些心脏、肺部疾病最常见的并发症，其发病机制尚未完全明确，但肺动脉血管内皮细胞、平滑肌细胞异常增殖以及细胞外基质积聚增加所造成的血管结构重建是肺动脉高压共同的病理改变。该部分研究探讨肺高压大鼠肺动脉血管结构改变与肺动脉压力的关系，观察肺高压腺泡内动脉组成变化。 方法 72只SD大鼠随机均分为对照组和模型组，野百合碱一次南京医科大学硕士学位论文性皮下注射法建立大鼠肺高压模型，右心导管法测平均肺动脉压力，计算右心室(RV)/左心室十室间隔(LV十S)比值作为右心肥厚指数，光镜下分析比较两组大鼠30一1 00林m及1 00一200林m肺动脉管腔和中膜面积变化并计算血管中膜细胞核数密度。 结果模型组大鼠在野百合碱注射后第14天出现右心室肥大，平均肺动脉压力开始升高，第21天平均肺动脉压力与对照组比较有显著性差异(p<0.01);野百合碱性肺高压大鼠30一200林m肺动脉中膜面积增加，管腔面积变小，腺泡内肌型动脉及部分肌型动脉所占百分比增加，非肌型动脉百分比显著减少;血管中膜平滑肌细胞核数密度增加，与对照组比较均有显著性差异。 结论野百合碱性肺高压大鼠肺血管结构发生改变，腺泡内非肌型动脉向肌型动脉和部分肌型动脉转变在肺高压形成和右，心室肥大过程中发挥重要作用。第二部分韧私素在野百合碱诱导 肺动脉高压大鼠肺组织中表达与分布 目的细胞外基质异常积聚及肺小动脉肌化是野百合碱性肺高压肺血管的特征性改变，TN是一种细胞外基质糖蛋白，参与细胞彩附、增殖、迁移等行为的调节。观察韧孙素(tenascin，TN)在肺高压大鼠肺动脉中的表达与分布，探讨其与肺高压肺血管重建的关系。 方法72只SD大鼠随机分为模型组和对照组，野百合碱一次性皮下注射法复制大鼠肺高压模型，右心导管法测平均肺动脉压力(mPAP)，计算右心室(RV)/左心室+室间隔(LV+S)比值作为右心肥厚指数，应用免疫组织化学染色、RT一PCR及蛋白免疫印迹等方法检测肺组织中TN表达与分布。 结果模型组大鼠第14天右心室肥大，平均肺动脉压力开始升高，第21天模型组大鼠mPAP明显升高，与对照组比较有显著性差异(尸<0.01)，第28天进一步升高达高峰;TN mRNA在对照组大鼠肺组织中微量表达，模型组大鼠TN mRNA表达水平于用药第4南京医科大学硕_{_学位论文天即发生改变，7天后显著升高，与对照组比较有显著性差异(P<0.05)，第14天达峰值;免疫组织化学染色显示TN在对照组大鼠肺动脉外膜处微量表达，第4天可在模型组大鼠肌型动脉见TN阳性染色信号，并随着平均肺动脉压力增加其分布范围更加广泛，第28天可在新生内膜处见TN阳性染色。免疫印迹显示TN蛋白表达增加，与TNmRNA表达水平呈同步变化。 结论野百合碱性肺高压大鼠肺组织中TN mRNA及其蛋白质表达均增加，TN可能参与肺高压肺血管结构重建过程，可能在肺小动脉结构重建过程中发挥重要作用。