目的： 研究低温冻存对外周血单个核细胞及脐血单个核细胞诱导为CIK细胞及其抗肿瘤效应的影响。 方法： 无菌采集健康献血员外周血及健康孕妇脐带血，以淋巴细胞密度梯度离心法提取其中的单个核细胞，每份收集到的单个核细胞一部分采用二甲基亚砜联合羟乙基淀粉为冻存保护剂的非程控降温方法冻存，冻存14天后复苏，通过加入IFN-γ、IL-2、CD3McAb等细胞因子使其定向诱导成CIK细胞，另一部分新鲜的单个核细胞直接按同样方法诱导为CIK细胞。利用改良的Mrr法测定效应细胞对人红白血病细胞株K562、宫颈癌细胞株Hela的细胞毒活性；利用流式细胞仪于不同时间检测CIK细胞的表型：对新鲜的与冻存复苏后的外周血及脐血单个核细胞诱导的CIK细胞进行扩增能力、细胞纯度、细胞毒活性等比较。 结果： 冻存的外周血及脐带血单个核细胞可以诱导出CIK细胞：CIK细胞在培养的第4-5天开始增殖，第12天达高峰，增殖的细胞表型以CD<,3><'+>CD<,56><'+>细胞为主，外周血冻存组CIK细胞所占相对百分率由约0.12％上升为约35％，绝对数增加约1750倍，脐血冻存组CIK细胞相对百分率由约0.14％上升为约36％，绝对数增加约1600倍。体外细胞毒实验显示：针对K562、Hela肿瘤细胞，冻存诱导的CIK细胞有很强的杀伤活性，与新鲜诱导的CIK细胞无显著性差异，且其细胞毒活性随效靶浓度比的增大而相应增加。 结论： 1．冻存的外周血及脐血单个核细胞可作为诱导CIK细胞的重要来源。 2．体外联合应用三种细胞因子能成功地将冻存的外周血及脐血单个核细胞诱导为大量的CIK细胞，其增殖高峰位于培养的第12天左右，适宜在此期进行临床输注。 3采用二甲基亚砜联合羟乙基淀粉为冻存保护剂的非程控降温法进行冻存外周血及脐血单个核细胞，方法简便、经济实用。