弓形虫病（Toxoplasmosis）是一种由刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）引起的人畜共患寄生虫病,许多温血动物会被弓形虫感染,包括人类和家畜。弓形虫感染可导致孕妇或母畜流产、产死胎、弱胎等。在中国,肉类是国民消费的主流之一,人类可因食用生肉或未煮熟的肉而感染弓形虫。这不仅对人类健康构成严重危害,对畜牧业的发展也造成了严重影响。因此,建立快速、准确的弓形虫检测方法,具有重要的公共卫生意义。重组酶聚合酶扩增（Recombinase polymerase amplification,RPA）技术是一种相对较新的等温扩增方法。该方法在高效的重组酶参与下,不需要模板链的热变性,可在恒温（25～42℃）条件下,5～20 min内可快速扩增出目的片段。该技术敏感性高、特异性强、反应快速、操作简便,可用于现场即时诊断中。将扩增产物与荧光探针结合,延伸出Exo-RPA检测方法,相对于PCR它更适合应用于现场检测。本研究目的是建立弓形虫Exo-RPA检测方法,并初步应用于肉类样品中,以评价Exo-RPA方法的检测实用价值,以期为我国弓形虫病的预防及控制、进出口检疫、肉类食品安全卫生等方面提供技术支撑。研究结果如下:1)弓形虫Exo-RPA检测方法的建立。首先,选择具有高度保守性的弓形虫B1基因作为靶标基因,通过设计引物、探针,筛选出最佳引物组、探针;其次,应用不同病原进行特异性评价,结果显示,该方法与微小隐孢子虫、贾第虫、新孢子虫、柔嫩艾美耳球虫、沙门氏菌、牛病毒性腹泻病毒、猪瘟病毒无交叉反应,表明该方法特异性较强;最后,提取弓形虫RH株基因组,进行PCR获取目的片段,构建质粒标准品,测定浓度并换算为copies/μL,随后进行倍比稀释,使浓度范围在10~7～10~0 copies/μL,以dd H2O为阴性对照,每个梯度设定8次重复,分析该方法的灵敏性,结果显示建立的弓形虫Exo-RPA方法检测限达到10~2copies/μL,灵敏度是实时荧光定量PCR（q PCR）方法的10倍。2)弓形虫Exo-RPA检测方法的应用。应用建立的弓形虫Exo-RPA检测方法对长春市5个地区的180份肉类样品进行检测,Exo-RPA方法检测出14份弓形虫阳性样品,阳性率为7.8%（14/180）;q PCR方法检出阳性率也为7.8%（14/180）。两种检测方法的符合率达100%,其中猪肉样品阳性率为10.8%（13/120）,牛肉阳性率为3.3%（1/30）,犬肉阳性率为0%（0/30）。综上所述,本研究建立了一种操作简单、特异性较强、灵敏度高的弓形虫Exo-RPA检测方法,对我国弓形虫病的防控工作具有重要意义。