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目的肺癌是世界范围内发病率和死亡率高居首位的恶性肿瘤。转移是导致肺癌病人预后不良的主要原因。业已证实，TC-1（c8orf4）在多种肿瘤组织中较正常组织表达异常增高，并同肿瘤的转移密切相关。但是，其在肺癌中的作用尚不明确。本课题旨在研究TC-1在非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭中的作用及其可能机制，为肺癌防治提供新靶点，开辟新思路。方法1．收集147例临床非小细胞肺癌（NSCLC）病人癌组织、配对正常肺组织标本，以及临床病理信息。采用免疫组化的方法检测TC-1在肺癌组织以及正常肺组织中的表达，并分析二者之间TC-1的表达差异，及其与年龄、性别、病理类型、临床TNM分期以及区域淋巴结转移的相关性。2．体外构建pLenti-TC-1，pLenti-TC-1si，pLenti-E慢病毒表达载体；转染肺癌A549细胞系；建立稳定的TC-1过表达（A549-TC-1（+））、低表达（A549-TC-1（-））及对照空病毒转染（A549-control）A549细胞系克隆。分别采用MTT实验检测TC-1对A549细胞增殖能力的影响，划痕实验检测TC-1对A549细胞迁移能力的影响，Matrigel侵袭实验检测TC-1对A549细胞侵袭能力的影响。3．采用realtime PCR及western blot检测A549-TC-1（+），A549-TC-1（-）以及A549-control三种细胞系Wnt/β-catenin通路基因β-catenin及下游靶基因VEGF，Cyclin D1，MMP-7，c-Myc和survivin在mRNA和蛋白水平的表达，探讨TC-1对A549细胞增殖、迁移和侵袭影响的可能机制结果1．免疫组化检测结果显示：TC-1在肺癌组织中表达于染色阳性细胞胞浆内，多呈弥漫性分布，其总体阳性率为65.99％（97/147）； TC-1表达在不同性别、年龄以及病理类型之间无明显统计学差异（P＞0.05），但与TNM分期以及区域淋巴结转移密切相关（P＜0.01）。在TNM分期中，Ia/b期患者TC-1的阳性率为58.00%（29/50），IIa/b期病人中的阳性率为63.16%（24/38），IIIa/b期病人中的阳性率为74.58%（44/59）。TC-1在N0病人中的阳性率为59.38%（38/64），在N1的病人中的阳性率为60.60%（20/33），在N2的病人中的阳性率为78.00%（39/50）。实验结果提示：TC-1在非小细胞肺癌中的表达与性别、年龄、病理类型无关，但是与临床TNM分期以及区域淋巴结转移情况存在正相关性。2．分别采用realtime-PCR以及Western blot检测筛选建立的A549-TC-1（+）、A549-TC-1（-）及A549-control细胞系，结果显示：克隆A549-TC-1（+）细胞系在mRNA及蛋白水平稳定高表达TC-1；克隆A549-TC-1（-）细胞系在TC-1表达量明显降低；克隆A549-control细胞系TC-1表达量与普通A549细胞系无明显不同。为了保证后续实验的严谨性以及可重复性，我们选择这三个克隆进行功能性实验。采用MTT实验检测TC-1对A549细胞增殖能力的影响，结果显示：A549-TC-1（+）细胞增殖明显快于A549-control，而A549-TC-1（-）细胞增殖最慢，各组之间具有显著统计学差异（P＜0.05）。表明：在肺癌A549细胞中，TC-1能够促进肺癌细胞增殖。采用划痕实验检测TC-1对A549细胞迁移能力的影响。结果显示：A549-TC-1（+）细胞迁移速度最快，而A549-TC-1（-）细胞迁移速度最慢。表明：在肺癌A549细胞中，TC-1能够促进肺癌细胞迁移。采用Matrigel侵袭实验检测TC-1对A549细胞侵袭能力的影响，结果提示：TC-1能够增强肺癌A549细胞侵袭能力。3．分别采用realtime-PCR及western blot检测Wnt/β-catenin通路基因在A549-TC-1（+），A549-TC-1（-）以及A549-control三种细胞系中的表达差异。结果显示，β-catenin基因及Wnt/β-catenin通路下游靶基因VEGF，Cyclin D1，MMP-7，c-Myc和survivin在mRNA和蛋白水平表达均存在差异，以A549-TC-1（+）细胞系为最高，A549-TC-1（-）细胞系为最低。表明：TC-1能够调节Wnt/β-catenin通路。结论1．TC-1在非小细胞肺癌中高表达，与临床TNM分期以及区域淋巴结转移呈正相关，而同年龄、性别、病理类型不相关。2．成功构建TC-1稳定过表达、低表达的A549细胞系（A549-TC-1（+））、（A549-TC-1（-））及对照空病毒转染的A549细胞系（A549-control）。经MTT实验、划痕实验、Matrigel侵袭实验证实：TC-1能够促进肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。3．肺癌A549细胞中过表达TC-1，能够增加Wnt/β-catenin信号通路中调节基因β-catenin及下游靶基因VEGF，Cyclin D1, MMP-7，c-Myc和survivin的mRNA及蛋白水平表达；而低表达TC-1蛋白的肺癌A549细胞则出现β-catenin，VEGF, CyclinD1，MMP-7，c-Myc和survivin mRNA及蛋白表达降低。表明：TC-1能够调节Wnt/β-catenin通路。本实验系统地研究了TC-1在非小细胞肺癌中的表达，在肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭中的作用以及与Wnt/β-catenin信号通路的关系。证明TC-1表达与肺癌TNM分期呈正相关；能够促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭；其机制可能是通过Wnt/β-catenin通路调节的；为肺癌转移的防治提供了新的思路，新的靶点。