归脾丸(浓缩丸)多指标质控方法研究

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目的:归脾丸(浓缩丸)由(党参、炒白术、炙黄芪、炙甘草、茯苓、制远志、木香、当归、龙眼肉等)11味药材组成,原标准(YBZ11062009)收载了4味药材的薄层鉴别与甘草酸的定量测定(HPLC)。但薄层鉴别需4种供试品溶液,4块薄层板,经4次薄层展开,而且供试品前处理繁琐、费时,需花费8小时,660ml有机试剂,污染环境,危害健康。甘草酸的定量测定在专属性上存在着问题,即供试品溶液在与甘草酸对照品相同的保留时间,其波峰的光谱扫描图与甘草酸的不一致,不是同一化合物或包覆着杂质峰,无法准确定量测定。且流动相还是缓冲盐体系,易损坏色谱柱。响应国家减排、降耗、提效的号召,在不降低检测指标的情况下,为制定简便、快捷、准确的归脾丸质量控制方法,对原方法进行了简化与提高研究,获得了理想的研究结果。  方法:采用同一甲醇超声的供试品溶液和甲醇超声的对照药材上清液,分别以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:2:0.2),三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨(12:1:3:0.5),环己烷-乙酸乙酯-甲酸(19:0.5:0.1),氯仿-甲醇-水(7:3:1)为展开剂,采用紫外光灯下直接检视或喷以10%硫酸乙醇溶液、或2%磷钼酸无水乙醇溶液,加热显色后日光下检视斑点的检视技术,在4块薄层板上,完成了当归、木香、白术、甘草、龙眼肉、党参和远志的薄层鉴别。采用HPLC法,以非缓冲盐体系乙腈-甲醇-0.1%磷酸(37:18:45),取代原缓冲盐体系甲醇-0.2%的乙酸铵-冰醋酸(55:45:0.5)作为流动相,以甘草酸铵、藁本内酯为测定指标,重新对供试品进行了提取溶剂(70%甲醇)、超声时间(15、20、30分钟)、检测波长(250nm)、色谱柱耐用性(3种不同厂家、不同型号色谱柱)、线性范围、精密度(5次连续进样)、稳定性(24h)、重复性(高、中、低剂量,9次测定平均值),回收率(高、中、低剂量,9次测定平均值)等一系列方法学探讨研究,建立了简便、快捷、准确、重现性好、精密度高的归脾丸质量控制新方法。  结果:突破了目前一个样品溶液,一块薄层板,一种显色剂,鉴别一味药材,繁琐、费时的传统鉴别方式,创建了同一种供试品溶液,在4块薄层板上,同时鉴别7味药材的快速鉴别新方法。该方法鉴别7味药材,只需供试品前处理溶剂(甲醇)20ml,展开剂30ml,时间4小时。与原标准比较,在增加3项薄层鉴别和藁本内酯定量测定的情况下,完成一批供试品还比原标准节约有机试剂640ml、时间4小时。通过多种流动相的重组与配比,以非缓冲盐取代了缓冲盐作为流动相,使供试品中的甘草酸与干扰成分得到有效分离,有效提高了定量测定的专属性。通过方法学考察,甘草酸进样量在0.0695~1.3900μg,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为:y=795463X-583,r=0.99999,最低检出限0.02μg,最低定量限0.06μg;藁本内酯进样量在0.1665~1.3320μg,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为y=556046X+611,r=0.99999,最低检出限0.03μg,最低定量限0.12μg;重复性实验表明:高、中、低剂量,9次测定的结果,甘草酸平均含量为1.46mg/g,RSD为0.64%,藁本内酯平均含量为1.02mg/g,RSD为1.21%;采用加样回收实验,高、中、低三剂量,9次测定的甘草酸和藁本内酯平均回收率分别为98.9%和99.0%,RSD为0.68%和0.75%(n=9);精密度、稳定性、专属性、色谱柱耐用性实验均符合方法学要求。  结论:简化和提高后的归脾丸质量标准,适用于生产中简便、快捷、准确、低成本,高效率地控制归脾丸质量。本方法的研究成功,不但解决了目前薄层鉴别繁琐、费时,有机溶剂消耗量大,易造成环境污染、危害操作人员健康的落后局面,而且体现了科技创新为社会带来的提高工作效率、节约检测成本、减少环境污染的显著经济效益与社会效益。提高效率,节约资源,降低成本,减少污染,则是从另一个角度发挥同样作用的硬指标。目前的中药质量标准不论鉴别还是含量测定,都存在着前处理提纯繁琐、毒害试剂用量大,费时长、成本高等弊端。如若本研究在同行中,能起到抛砖引玉的示范作用,其对社会的贡献将是不容忽视的。
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