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目的:研究重组腺病毒pAd5F35-IL-12成功感染人外周血单核细胞后,高表达IL-12的单核细胞是否可以诱导其成为抑制肝癌细胞生长的M1型巨噬细胞,探讨是否与Stat-3信号通路有关。方法:采用Ficoll-Paque分离液分离新鲜的人外周血单核细胞,然后让重组腺病毒pAd5F35-IL-12感染单核细胞。感染腺病毒48小时后的单核细胞和人肝癌细胞株(SMMC-7721和Hep3B)在共培养小室中进行体外共培养,每一种肝癌细胞株都分别设立3个实验组,分别是空白组(SMMC-7721和Hep3B),空载组(SMMC-7721/GFP和Hep3B/GFP),目的组(SMMC-7721/IL-12和Hep3B/IL-12)。分别检测两种肝癌细胞共培养体系中IL-12的表达情况,单核细胞分化表型及Stat-3信号通路的变化以及体内外肝癌细胞的生长情况。采用荧光显微镜观察感染了带有绿色荧光蛋白的重组腺病毒pAd5F35-IL-12的单核细胞是否发出绿色荧光,使用RT-PCR方法检测IL-12的P35、P40亚基的mRNA水平的表达情况,ELISA方法检测共培养体系培养基中IL-12 P70蛋白的表达水平。采用流式细胞术检测共培养体系中的单核细胞分化为巨噬细胞的表面分化标志cd197(m1型巨噬细胞表面分化标志)和cd206(m2型巨噬细胞表面分化标志)的平均荧光强度值mfi,分别使用定量pcr方法和elisa方法检测共培养上清中巨噬细胞表型分化相关因子il-10、il-12、tgf-β、vegf-a、mmp-9的表达情况。进一步采用westernblot方法检测共培养体系中过表达il-12的单核细胞的stat-3信号分子及其下游c-myc基因的变化情况。最后在体内外分别研究肝癌细胞的生长情况,在体外实验中,cck8法和细胞克隆实验检测肝癌细胞的增殖情况,流式细胞术检测共培养后肝癌细胞的细胞周期变化,transwell实验检测肝癌细胞的侵袭能力;体内实验中,观察nod/scid小鼠中成瘤情况和绘制肿瘤生长曲线,免疫组织化学方法检测肿瘤生长相关指标(pcna、mvd)表达情况。结果:重组腺病毒pad5f35-il-12能够感染新鲜分离的人外周血单核细胞,发出绿色荧光,分泌表达il-12p70蛋白;在单核细胞和肝癌细胞的共培养体系中,和空白组和空载组相比,目的组中过表达il-12的单核细胞cd197、il-12的表达升高,cd206、il-10、tgf-β、vegf-a、mmp-9的表达下降,stat-3和c-myc基因的mrna和蛋白水平都下降;体外实验研究结果发现共培养体系中,和空白组和空载组相比,目的组中肝癌细胞的瑞氏染色形态变化明显,细胞变圆,细胞核和细胞质之间的边界变模糊;cck-8实验和克隆形成实验中目的组的肝癌细胞株的细胞增殖能力下降,克隆形成率下降;目的组肝癌细胞周期g1期升高,s期下降;目的组肝癌细胞侵袭能力下降。动物移植瘤模型实验研究结果发现,目的组肝癌成瘤时间延长,肿瘤生长率下降,增殖细胞核抗原PCNA阳性细胞率下降,平均血管密度MVD减少。结论:重组腺病毒pAd5F35-IL-12能够有效的感染新鲜分离的人外周血单核细胞,分泌较高水平的IL-12 P70蛋白。共培养体系中过表达IL-12的单核细胞可以分化为M1型巨噬细胞,其机制可能与Stat-3和c-myc信号通路的下调有关。体内、外研究证实过表达IL-12可诱导单核细胞极化为M1型巨噬细胞,并且可以使与其共培养的肝癌细胞生长受到明显的抑制。