【摘 要】
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目的:通过研究过表达miR-378a基因递送至SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMMSCs）膜片的可行性及对膜片成骨及成血管分化能力的影响与作用机制,探讨miR-378a作为骨组织工程基因治疗潜在工具的可行性及其对骨缺损修复的影响。方法:分离培养SD大鼠BMMSCs并鉴定其表型及定向分化能力;预实验摸索慢病毒载体（LV）转染BMMSCs的最佳感染条件,选用合适滴度的miR-378a慢病毒载体（LV-mi
【基金项目】
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新疆维吾尔自治区科技支疆项目（2018E02060）；
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目的:通过研究过表达miR-378a基因递送至SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMMSCs）膜片的可行性及对膜片成骨及成血管分化能力的影响与作用机制,探讨miR-378a作为骨组织工程基因治疗潜在工具的可行性及其对骨缺损修复的影响。方法:分离培养SD大鼠BMMSCs并鉴定其表型及定向分化能力;预实验摸索慢病毒载体（LV）转染BMMSCs的最佳感染条件,选用合适滴度的miR-378a慢病毒载体（LV-miR-378a）和空载慢病毒（LV）感染BMMSCs,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测慢病毒转染效率;CCK-8法检测慢病毒感染BMMSCs后的细胞毒性;然后对转染后的BMMSCs进行成膜及成骨诱导培养,分别于3、7、14天时通过倒置显微镜观察膜片形态,进行碱性磷酸酶（ALP）染色和RT-PCR检测,并于14天时进行Western blot检测成骨及成血管相关指标的表达水平。结果:（1）流式和激光共聚焦结果显示:慢病毒转染BMMSCs完成后绿色荧光蛋白EGFP表达无明显差异,CCK-8结果提示,与空白组及LV-BMMSCs组比较,LV-miR-378a-BMMSCs组细胞增殖速度加快;（2）成膜诱导2d、6d时,3组BMMSCs膜片镜下的形态学变化无明显差异,3组膜片进行成骨诱导3d、7d、14d后均发生成骨分化现象,ALP染色结果显示,各时间段的LV-miR-378a-BMMSCs组黑色沉淀物数量最多、颜色最明显;（3）RT-PCR结果表明,从基因m RNA水平上,与空白组及LV-BMMSCs组比较,LV-miR-378a-BMMSCs组的成骨及成血管分化相关基因Runx相关转率因子2（Runx2）、I型胶原（COLI）、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍生生长因子（PDGF）均明显升高（P<0.001）;（4）Western blot结果表明,在蛋白水平上,LV-miR-378a-BMMSCs组膜片可合成更多的Runx2和VEGF蛋白,明显高于空白组（P<0.01）及LV-BMMSCs组（P<0.001）。结论:过表达miR-378a慢病毒载体可递送至BMMSCs膜片中,同时可以在一定程度上增强BMMSCs的增殖和BMMSCs膜片的骨生成及血管生成能力。
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