一、研究背景
　　肿瘤细胞之所以能逃避免疫监视，其重要原因是缺乏免疫共刺激信号[1]。CD80是一种重要的免疫共刺激分子，参与机体免疫反应，刺激初始T细胞活化分化为辅助T细胞(Th)，并且能调节免疫调节细胞(Treg)、免疫记忆细胞(Tm)、免疫效应细胞(Te)的作用，提供共刺激信号介导肿瘤免疫[2]。
　　霍乱毒素B亚基(CTB)是霍乱毒素与肠上皮细胞识别并结合的调节亚基，与神经节苷脂M1受体(GM1)特异性结合，没有肠毒性，是提高口服疫苗粘膜免疫的主要手段之_[3]。
　　乳酸菌是人和动物肠道中重要益生菌，具有多种功能，在下消化道存留时间较长，数量多，并有累计效应，利于肽类药物表达及吸收利用，适合做肠道内表达和给药的载体。
　　二、研究目的
　　以食品级的乳酸菌作为宿主菌表达重组人可溶性CD80融合蛋白，并分析对肿瘤的免疫治疗作用。
　　三、研究方法
　　用分子克隆技术构建hsCD80-CTB融合基因表达载体pLAB-hsCD80-CTB和hsCD80表达载体pLAB-hsCD80作为实验对照，分析CTB的介导作用。用电穿孔法转化乳球菌，筛选、鉴定、保种。体外实验:选择转化菌最佳诱导条件，分析融合蛋白的细胞内吞转化及小鼠脾脏淋巴细胞活化水平的刺激作用。体内实验:分析转化菌在肠道内的诱导表达及内吞转化规律，治疗小鼠结肠腺癌细胞(CT26)移植瘤和小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)移植瘤模型，观察瘤体的病理变化及分析脾脏T淋巴细胞的活化水平，明确hsCD80-CTB转化菌的治疗作用。
　　四、研究结果
　　(1)成功构建含hsCD80-CTB和hsCD80基因的pLZ-hsCD80-CTB和pLZ-hsCD80表达载体。
　　(2)成功将其转入乳酸乳球菌L23900，获得LZ-hsCD80-CTB和LZ-hsCD80。
　　(3)体外转化菌融合蛋白最佳诱导时间为6h，低聚糖诱导剂最佳诱导浓度为0.2％(w/v)。
　　(4)体外LZ-hsCD80-CTB表达融合蛋白，在CTB介导下能被肠上皮细胞内吞和释放具有免疫活性的的hsCD80，能活化T细胞、促进IFN-γ表达。
　　(5)LZ-hsCD80-CTB喂饲小鼠后能在肠道内诱导表达，并能被肠上皮细胞吸收和转化，hsCD80能释放入血液循环。
　　(6)体内治疗试验，LZ-hsCD80-CTB肠道内表达及转化融合蛋白对结肠癌移植瘤和黑色素癌移植瘤有显著的治疗效果，能够延长荷瘤小鼠的生存期、抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤血管生成，并且能够诱导肿瘤细胞凋亡。
　　(7)肠道表达及转化的hsCD80-CTB融合蛋白对脾脏淋巴细胞有较好的免疫刺激作用。
　　五、研究结论
　　成功构建表达重组人可溶性CD80的重组乳酸菌。该转化菌在肠道内能可控分泌hsCD80-CTB融合蛋白，被肠上皮细胞内吞转化，提高T淋巴细胞活化水平并刺激IFN-γ分泌，提高小鼠机体免疫，延长生存期，抑制肿瘤生长并诱导肿瘤凋亡，对肿瘤具有显著的治疗效果。