MSCs在雌激素剥夺条件下对MCF-7乳腺癌细胞系生长的影响及其机制研究

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目的:  研究在体内外雌激素剥夺条件下骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)对MCF-7乳腺癌细胞系生长的影响及其潜在的作用机制。  方法:  1、通过双侧卵巢切除术构建雌激素剥夺的裸鼠模型,后面简称去势裸鼠。将MCF-7细胞和MSCs备制成单细胞悬液或混合细胞悬液,收集MSCs的条件培养液(Conditioned medium,CM),用CM预处理MCF-7细胞。在裸鼠腋区皮下进行注射,建立荷瘤模型模仿乳腺癌肿瘤的生长,观察MSCs及CM对荷瘤小鼠移植瘤生长的影响。  2、免疫组织化学染色法检测去势裸鼠移植瘤组织MSCs的表达。  3、CCK-8实验、流式细胞术检测在体外雌激素剥夺(Estrogen deprivation,ED)条件下CM对MCF-7.细胞增殖和凋亡的影响。  4、Real-time PCR检测MSCs中转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA的水平,酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测CM中TGF-β1的浓度。  5、采用siRNA技术抑制TGF-β1分泌,建立荷瘤模型,观察TGF-β1分泌减少后MSCs及CM对荷瘤小鼠移植瘤生长的影响。  6、CCK-8实验、流式细胞术检测TGF-β1分泌减少后CM对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。  结果:  1、裸鼠成瘤实验结果显示,MCF-7细胞在非去势裸鼠组体内所形成的移植瘤生长速度显著快于去势裸鼠组(P<0.05);在去势裸鼠体内MCF-7+MSCs组移植瘤的体积及重量大于MCF-7组(P<0.05);CM组在非去势裸鼠组及去势裸鼠组体内的移植瘤体积及重量无显著差异(P>0.05);在去势裸鼠体内CM组移植瘤的体积及重量大于MCF-7组(P<0.05)。  2、免疫组织化学染色结果显示:MSCs在去势裸鼠移植瘤组织中随机分布;相较于MCF-7组,MCF-7+MSCs组移植瘤组织中组织阶段特异性胚胎抗原4(Stage specific embryonic antigen4,SSEA-4)阳性细胞的数量明显增多。  3、CCK-8实验和流式细胞术结果显示:ED组细胞增殖能力小于Control组(P<0.05);ED+CM组细胞增殖能力大于ED组(P<0.05);ED组细胞凋亡率大于Control组(P<0.05);ED+CM组细胞凋亡率小于ED组(P<0.05)。  4、Real-time PCR和ELISA结果显示:MSCs可以分泌大量的TGF-β1;连续培养24h组的CM中TGF-β1浓度大于连续培养12h组(P<0.05)。  5、采用siRNA抑制TGF-β1分泌的裸鼠成瘤结果显示:在去势裸鼠体内MSCssi-TGF-β1组、CMsi-TGF-β1组移植瘤的体积及重量均小于相对应的MSCssi-vector组、CMsi-vector组(P<0.05)。  6、采用siRNA技术抑制TGF-β1分泌后CCK-8实验和流式细胞术结果显示:CMsi-TGF-β1组细胞增殖能力小于CMsi-vector组(P<0.05);CMsi-TGF-β1组细胞凋亡率大于CMsi-vector组(P<0.05)。  结论:  1、MSCs在去势裸鼠移植瘤组织中随机分布并且数量相对较多。  2、在体内雌激素剥夺的条件下,MSCs明显促进去势裸鼠移植瘤的生长。  3、在体内外雌激素剥夺的条件下,MSCs可能通过TGF-β1促进了MCF-7细胞的生长。
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