低频超声联合微泡造影剂对乳腺癌细胞增殖活力的影响及机制研究　　第一部分细胞凋亡在低频超声联合微泡造影剂抑制乳腺癌细胞增殖活力中的作用　　目的：　　探讨细胞凋亡在低频超声联合微泡造影剂抑制乳腺癌细胞增殖活力中的作用及机制研究。　　方法:　　培养MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，采用功率0.5 W/cm2的1 MHz低频超声联合微泡造影剂，作用细胞60 s后，western blotting检测Caspase-3，膜联蛋白V/PI染色和DAPI染色分析MDA-MB-231细胞凋亡水平。Z-VAD-FMK抑制凋亡，使用CCK-8分析凋亡对MDA-MB-231细胞的作用。　　结果:　　成功培养出MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。结果显示低频超声联合微泡造影剂促进Caspase-3蛋白质水平升高，凋亡率增加。抑制凋亡后明显缓解低频超声联合微泡造影剂对细胞增殖活力的抑制作用(P<0.05)。　　结论：　　说明低频超声联合微泡造影剂通过激活凋亡抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖活力。　　第二部分自噬在低频超声联合微泡造影剂抑制乳腺癌细胞增殖活力中的作用　　目的：　　探讨自噬在低频超声联合微泡造影剂抑制乳腺癌增殖活力中的作用及机制研究。　　方法:　　培养MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，采用功率0.5 W/cm2的1 MHz低频超声联合微泡造影剂，作用细胞60 s后，OA染色、电镜和GFP-LC3转染观察自噬的数量，western blotting检测LC3-Ⅱ、ATG5和SQSTM1/P62蛋白质水平变化，分别分析自噬水平。ATG5 siRNA转染抑制自噬，使用CCK-8分析自噬对MDA-MB-231细胞的作用。　　结果:　　低频超声联合微泡造影剂促进LC3-Ⅱ和ATG5蛋白质水平显著升高，而使SQSTM1/P62蛋白质水平显著下降(P<0.05)。透射电镜和共聚焦荧光显微镜观察发现MDA-MB-231细胞自噬体数量增加。ATG5 siRNA转染抑制自噬后，明显缓解了低频超声联合微泡造影剂对细胞增殖活力的抑制作用(P<0.05)。　　结论：　　根据实验结果，说明低频超声联合微泡造影剂通过激活自噬抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖活力。