论文部分内容阅读
目的:化疗耐药的产生是肿瘤治疗中面对的主要挑战。上皮性卵巢癌死亡率高、预后差,患者多死于肿瘤复发和耐药。肿瘤耐药与多种因素相关,mi RNA可能与耐药密切相关。我们发现mi R-506是一种与化疗耐药相关的上皮-间质转化的有效抑制剂。我们认为mi R-506影响了高级别浆液性卵巢癌的化疗反应。本研究中,我们讨论mi R-506是否能增加浆液性卵巢癌细胞顺铂和PARP抑制剂的敏感性及通过检测mi R-506对靶基因EZH2-β-catenin信号通路的调控作用,阐述mi R-506发挥药物增敏作用的机制。方法:本研究分为三个部分进行:1.通过荧光素酶报告系统证明mi R-506通过直接抑制EZH2的3’非编码区(3’-untranslated region 3’-UTR),从而下调β-catenin的表达。在卵巢癌细胞系Hey A8过表达mi R-506,western blot检测EZH2和β-catenin蛋白表达。检测mi R-506是否能够下调EZH2和β-catenin水平。2.转染不含3’UTR的EZH2和mi R-506或对照mi R mimics,以及应用si RNA敲除EZH2,观察EZH2和β-catenin蛋白水平及顺铂和PARP抑制剂药物敏感性的变化。3.分别过表达β-catenin活性载体和应用β-catenin抑制剂FH535处理卵巢癌细胞后,观察药物敏感性的变化以及过表达β-catenin对mi R-506调控药物敏感性的影响。结果:1.在卵巢癌细胞系Hey A8中与对照组相比mi R-506可显著下调EZH2和β-catenin的蛋白水平;搜索Target Scan(http://www.targetscan.org/)得到了mi R-506与EZH2的结合位点;荧光素酶报告实验中与阴性对照相比,共转染mi R-506mimcs和EZH2质粒后发现,在过表达mi R-506时,野生型3’-UTR报告载体的荧光与突变组的荧光相比明显减弱。(P<0.01)。2.卵巢癌Hey A8/SKOV3细胞系与对照组相比,下调EZH2后,β-catenin蛋白水平显著下降,加入顺铂/奥拉帕尼后在450nm处的OD值明显下降;上调EZH2后,β-catenin蛋白水平显著升高,加入顺铂/奥拉帕尼后在450nm处的OD值明显升高;过表达不含3’-UTR的EZH2可以部分补救mi R-506对顺铂和奥拉帕尼敏感性的影响。(P<0.05)。3.卵巢癌Hey A8/SKOV3细胞系与对照组相比,下调β-catenin后,加入顺铂/奥拉帕尼在450nm处的OD值明显下降,细胞的克隆形成率明显降低;上调β-catenin后,加入顺铂/奥拉帕尼在450nm处的OD值明显升高,细胞的克隆形成率明显增加;过表达不含3’-UTR的β-catenin可以部分补救mi R-506对顺铂和奥拉帕尼敏感性的影响。(P<0.05)。结论:通过本实验,可以得出以下几个结论:1.EZH2是mi R-506的直接靶点。2.Mi R-506可以抑制EZH2-β-catenin信号通路。3.Mi R-506发挥药物增敏作用的机制是通过靶向EZH2抑制β-catenin信号通路。