【摘 要】
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研究目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路角度初步探讨其可能的机制。材料和方法:MC3T3-E1细胞购自协和医科
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研究目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路角度初步探讨其可能的机制。材料和方法:MC3T3-E1细胞购自协和医科大学细胞库,培养传代,取第六代细胞用于实验。实验分为4组,分别为空白对照组、CGRP组、CGRP+CGRP拮抗剂(CGRP8-37组)、CGRP+DKK1组。培养4、7、14 d应用荧光定量核酸扩增(Q-PCR)检测法检测各组碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、RUN X2基因、及Wnt/β-catenin信号通路相关基因(C-myc、β-catenin、TCF、LEF)的表达;培养4、7、14 d,Western blot检测各组β-catenin蛋白水平的表达情况;最后于培养7d,采用免疫荧光染色判断四组中β-catenin蛋白的细胞核转移情况。结果:1.采用茜素红、ALP染色法染色分别观察到MC3T3E1细胞外基质存在钙质沉积,而且MC3T3E1细胞碱性磷酸酶(ALP)活性阳性;2.CGRP能明显提高MC3T3-E1细胞成骨有关基因(ALP、OC、COLⅠ、RUN X2基因)以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因(C-myc、β-catenin、TCF、LEF)的表达;3.Westernblot结果提示CGRP可以明显促进β-catenin蛋白的表达及其核内聚集,而CGRP受体拮抗剂和DKK1明显抑制这一作用;4.结论:MC3T3E1细胞本身具有一定的成骨细胞特性,有效浓度的CGRP能促进小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化,Wnt/β-catenin信号转导通路在成骨分化过程中起一定的调节作用。
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