γ-干扰素(IFN-γ)是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的重要细胞因子。研究表明,内源性IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映机体的细胞免疫状态,因此对样本中的IFN-γ进行定量分析,在免疫机制研究、免疫功能分析、疫苗免疫效果评估、器官移植、过敏反应以及多种胞内病原感染的诊断等方面都具有极其重要的理论价值和应用价值。本实验旨在制备鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)单克隆抗体并建立对鸡γ-干扰素的定量ELISA检测方法。本研究利用在大肠埃希氏菌中原核表达的鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)免疫8周龄BALB/c鼠3次后,按标准程序融合后,以昆虫细胞表达的rChIFN-γ作为检测抗原,通过间接ELISA和有限稀释法筛选了阳性杂交瘤细胞株,利用阳性的杂交瘤细胞制备腹水单抗并测定其效价,通过Western-blot和单抗中和试验分析了rChIFN-γ与单抗之间的特异性。对单抗IgG进行了HRP,FITC及生物素标记,测定了三种标记单抗的效价。在测定原核表达rChIFN-γ的浓度和滴定昆虫细胞表达rChIFN-γ的抗病毒的活性的基础上,建立了鸡γ-干扰素的定量ELISA检测方法。通过ConA刺激SPF鸡脾淋巴细胞产生了IFN-γ,并利用FITC标记的单抗对其进行了初染。通过以上试验获得了一株能够稳定分泌抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,该株单抗命名为G1株,其腹水效价为1:1×105。Western-blot分析和单抗中和试验表明抗原抗体之间有很好的特异性;对单抗IgG进行HRP,FITC及生物素标记效价分别达到1:5000,1:100,1:5000。利用纯化的单抗对原核表达rChIFN-γ建立的定量ELISA,其回归方程为y=2.2742*x+0.105,回归系数R=0.975,最低检测浓度为15ng/ml,批内变异系数和批间变异系数均小于10%。利用昆虫细胞表达rChIFN-γ建立的定量ELISA,其回归方程为y=0.1164*x-0.1281,回归系数R=0.9539。ICC初染结果为按10μg/ml的ConA刺激鸡脾淋巴细胞,分泌的鸡IFN-γ的阳性率为1.71%。结论:本实验制备的抗鸡γ-干扰素单克隆抗体性质稳定,腹水单抗效价高,利用HRP,FITC及生物素标记的单抗IgG的效价均达到有效的使用效价。重组鸡γ-干扰素对单抗绘制OD值-抗原浓度标准曲线具有良好的线型关系,且二者之间具有较好的特异性、重复性和稳定性。ICC初染试验表明本实验制备的单抗能够与天然的鸡γ-干扰素发生特异性反应。