肝癌特别是肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是在世界范围发病率和致死率都相当高的恶性肿瘤,严重危害人类的生命健康,目前缺少有效的治疗方法。我国一直是肝癌的高发区,同时肝癌的发病率也在逐年递增,因此寻求有效肝癌防治策略的研究具有重要的科学价值和社会意义。细胞周期调节失控是肿瘤细胞恶性增殖的重要原因之一.CDK4是细胞进入增殖阶段首个被活化的周期蛋白依赖性激酶,是细胞周期进程中G1/S期转换的限速因子。CDK4的过度表达发生在多种类型的人类癌症的肿瘤中包括肝细胞癌。胞内抗体是指在细胞内表达并作用于细胞内组分的抗体,能够靶向细胞内特异性抗原,敲除细胞内重要靶蛋白功能,胞内抗体作为一类新分子在抗肿瘤基因治疗中也显示出巨大潜力和应用前景。本课题组前期研究中,利用胞内抗体技术制备了靶向CDK4胞内抗体NLS-AK,并且该胞内抗体有效抑制乳腺癌细胞增殖和迁移,但对肝癌细胞的生长和增殖是否有抑制作用尚不清楚。本研究从细胞水平以及动物水平体内外分析了靶向CDK4胞内抗体NLS-AK对肝癌的抑制效应。通过RT-PCR、Western blot以及间接免疫荧光实验证明抗CDK4胞内抗体在HepG2细胞的表达和定位。免疫共沉淀实验表明了抗CDK4胞内抗体能够与HepG2细胞内源性的CDK4特异性结合。MTT实验表明NLS-AK能够抑制HepG2细胞的生长和增殖,流式细胞分析结果表明,NLS-AK在HepG2细胞内的表达能够引起HepG2细胞周期G1期阻滞,并且能诱导HepG2凋亡。划痕实验表明靶向CDK4胞内抗体NLS-AK的表达能够显著的抑制HepG2细胞的迁移能力。我们建立了肝癌异体移植瘤治疗模型,结果发现,NLS-AK能够有效地抑制裸鼠体内肝癌移植瘤的生长,具有很好的抑制肝癌发展的作用,本研究为靶向CDK4胞内抗体的肝癌临床治疗提供了一定的实验依据。