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研究目的：制备中药活性成分—人参皂苷Re的单克隆抗体,基于单克隆抗体建立相应的免疫分析方法,并对其进行方法学考察；为中药人参及含有人参的复方的质量控制、体内代谢过程等研究提供一种新的技术手段；制备免疫亲和色谱柱,敲除中药人参中的人参皂苷Re成分,为下一步人参皂苷Re药理药效研究做好铺垫。实验方法：(1)采用改进的高碘酸钠氧化法合成GRe人工免疫抗原(GRe-BSA)和人工包被原(GRe-OVA),利用薄层色谱法及紫外光谱法鉴定GRe-BSA和GRe-OVA；(2)用GRe-BSA多次免疫BALB/c小鼠后,通过间接ELISA方法测定免疫小鼠抗血清的效价和特异性；(3)采用PEG法诱导免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,有限稀释法进行单克隆细胞株的筛选,腹水诱导法生产大量的单克隆抗体；(4)基于单克隆抗体建立间接竞争ELISA方法,考察该方法的特异性、灵敏度、交叉反应率、回收率、准确性等相关指标；(5)利用人参皂苷Re ELISA分析方法检测人参复方中人参皂苷Re含量,揭示中药配伍规律；(6)人参皂苷Re单克隆抗体,经琼脂糖凝胶活化、抗体偶联、封闭、洗杂、平衡后,装柱并制备人参皂苷Re免疫亲和层析柱,敲除人参提取液中的人参皂苷Re；(7)用人参皂苷Re ELISA分析方法研究人参在人体内的代谢。实验结果：(1)紫外光谱和薄层色谱法检测结果表明,GRe与BSA/OVA偶联成功；小鼠抗血清效价大于1：60000,竞争抑制曲线表明,血清中的抗GRe抗体可与GRe产生特异性结合。取GRe-BSA免疫的小鼠脾细胞进行细胞融合,有限稀释法筛选出能分泌抗GRe抗体的单克隆细胞株2F4-3H10。应用制备的腹水中的单抗GRe-Mab-2F4-3H10,建立间接竞争ELISA法,并对其反应条件进行了优化。腹水效价大于1：256000。(2)在包被原GRe-OVA1:4000稀释,纯化腹水1：20000稀释条件下,得到GRE-Mab-2F4-3H10的抑制率与线性关系曲线,计算显示线性范围为7.8-500ng/mL,回归方程为：y=-0.2261og2(x)+1.4384,R2=0.998。灵敏度(50%抑制时的浓度)为64.4ng/mL,最低检测量为0.39ng。回收率在92.7-107%(99.32%),批内差异<5.77%,批间差异<8.76%。(3)通过间接竞争ELISA法检测单抗与人参及其它中药活性成分反应的交叉反应率。结果显示与人参皂苷Rgl、人参皂苷Rd交叉反应率分别为100%、25.55%,与其他成分的交叉反应率均小于0.10%。表明本研究得到的抗人参皂苷Re单抗对人参有很好的特异性。(4)十五个人参的方剂中,半夏泻心汤中人参皂苷Re含量最高,炙甘草汤含量最低；(5)紫外光谱和薄层色谱法检测结果表明成功制备了人参皂苷Re免疫亲和色谱柱。(6)人体唾液内检测结果显示,在口服人参颗粒0.01g/kg后90分钟达吸收峰,其相关药代动力学参数如下：Cmax:258.83ng/mL, AUCo-t:72594(min)·(ng/mL), MRT:384.978min。结论：高碘酸钠法成功合成了人参皂苷Re人工抗原,人参皂苷Re单克隆抗体的效价、灵敏度、特异性均较高,其酶联免疫吸附分析方法的回收率、准确度等均符合药物分析标准,可用于人参皂苷Re的含量分析,比常规的HPLC方法更加快速准确,前处理方法更加简化。免疫亲和层析柱可用于中药提取液或复方中的物质敲除。