论文部分内容阅读
胃癌发生发展是一个多因素、多阶段和多基因变异的复杂演变过程.以往的研究已确定胃癌中ras、erbB2等癌基因和p53、APC等抑癌基因突变或表达异常.近几年来的研究发现胃癌线粒体DNA（mitochondrialDNA，mtDNA）某些区域存在突变或缺失，但对mtDNA全序列突变状况还缺乏认识.为了进一步了解胃癌mtDNA突变的频率、类型和位点分布，我们运用变性高效液相色谱技术对30例胃癌组织（20例肠型胃癌，10例弥漫型胃癌）及对应的正常组织，13个胃癌细胞系线粒体基因组进行了突变筛查和测序分析.为了提高DHPLC对具有复杂异质性的mtDNA突变的分辨力，我们预先对DHPLC检测条件进行了优化，主要包括DHPLC紫外检测的灵敏性分析、温度和DNA聚合酶等对DHPLC分辨力的影响.研究结果表明DHPLC紫外检测系统能检出PCR混合物中5﹪的微量突变成分，最适检测温度通常是使DNA双链的百分含量约为80﹪，PfuDNA聚合酶更适合DHPLC检测.结果进一步明确了胃癌组织和细胞系中存在高频率的mtDNA突变.呼吸链酶复合体I基因，特别是ND4、ND5基因高频率突变，为进一步阐明mtDNA突变与胃癌发生、发展的关系提供了重要的线索.