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目的:喉鳞状细胞癌在我国是一种较为常见的耳鼻咽喉部恶性肿瘤,随着医学水平的不断发展以及相关各个领域的深入研究,其治愈率及预后已经有了较大的提高,但晚期喉鳞癌患者的总体治疗效果及生存状态都不甚满意。因此,对喉鳞癌发病机制、发展过程等进一步的研究,以期能够做到早发现、早治疗并提高预后已成为目前临床研究的热点。随着医学的不断发展,已有各种实验研究结果表明:细胞凋亡在肿瘤发生发展过程中也起到了极为关键的作用。业已发现,凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)是一种重要的抑制细胞凋亡的生物成分。Survivin则被诸多实验研究证实为是IAP中最新发现的因子。Survivin具有强力的抗凋亡能力,是目前所知的最强的抗凋亡因子。随着对Suvrinvi的研究的不断的深入,发现其与恶性肿瘤有着各种各样的紧密联系,包括抗凋亡信号传导、肿瘤新生血管形成等各方面。增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)是一种分子质量为36KD的非组蛋白细胞核多肽。目前的研究已经证明PCNA是可以反映恶性肿瘤细胞增殖活性的一项良好的指标,其在肿瘤细胞中的含量反映了肿瘤增生能力的高低。通过研究宫颈鳞癌、腺癌、晚期卵巢癌、软组织肉瘤等多种恶性肿瘤发现,较高PCNA表达的病例化疗效果都较好,因而提出一个结论:肿瘤细胞的PCNA表达水平可以预测某些肿瘤对化疗的敏感性。本实验以人喉鳞状细胞痛组织为主要研究对象,通过免疫组织化学染色方法,观察Survivin蛋白、PCNA蛋白在人喉鳞状细胞癌中的表达,初步探讨Survivin与PCNA与人喉鳞状细胞癌的关系,进一步在人喉鳞状细胞癌中验证Survivin蛋白、PCNA蛋白在恶性肿瘤发生发展过程中的作用,为探寻人喉鳞癌的可能发生机制及其临床诊断和合理治疗提供理论依据。 方法:⑴收集华北石油总医院耳鼻咽喉科2009年12月~2011年8月资料完整的喉鳞状细胞癌病例共45例,患者术前均未经任何干预肿瘤的各种治疗。手术取材包括喉鳞癌组织以及距癌边缘2cm以上的正常喉粘膜组织,以及同期临床手术切除后病理证实为喉良性息肉38例,直径各约1.0cm,标本均存放于10%甲醛内。⑵应用免疫组织化学染色方法观察喉鳞癌组织、喉良性息肉组织和正常喉粘膜组织中Survivin、PCNA蛋白的表达。⑶Survivin蛋白主要在细胞浆内表达,以出现黄色、棕黄色、棕褐色颗粒为阳性表达。光镜下在400倍放大下随机选择10个视野,每个视野均计数100个细胞,阳性细胞数≤5%为0分,6-25%为1分,26-50%为2分,≥51%为3分;对每张切片阳性细胞的染色强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕色分别标记为0,1,2,3分,两项评分之和为该标本的总得分,大于2分者为阳性,低于或等于2分者为阴性。PCNA蛋白表达主要在肿瘤细胞的细胞核,呈黄色、棕黄色、棕褐色颗粒。其结果判定标准同Survivin表达的判定标准。⑷应用SPSS13.0软件对结果进行统计处理。目的蛋白表达水平均应用卡方检验分析,检验水准α=0.05。 结果:①在肿瘤细胞的细胞浆中出现了大小不等,染色强度不一的颗粒。正常喉粘膜组织47例,(-)45例、(+)2例,阳性率4.3%;喉良性息肉组织38例,(-)35例、(+)3例,阳性率7.9%;45例喉鳞状细胞癌中36例表达阳性,阳性率为80%,其中(-)9例、(+)36例。Survivin在喉鳞癌中的表达明显高于喉良性息肉组和正常喉粘膜,差异显著。Survivin与肿瘤生长部位、临床分期以及淋巴结转移等临床因素有关,原发肿瘤越接近解剖上缘、临床分期越早、淋巴转移越明显则Survivin表达越强。Survivin表达与患者性别、年龄、病理分级等因素无关。②在肿瘤细胞的细胞核出现了大小不等,染色强度不一的颗粒,胞浆及包膜均未着色。其阳性表达的细胞胞核呈棕黄色,为团巢状、条索状或弥散状。正常喉粘膜组织47例,(-)37例、(+)10例,阳性率21.3%。喉良性息肉组织38例,(-)29例、(+)9例,阳性率23%;45例喉鳞状细胞癌中表达(+)29例,(-)16例,阳性率为64.4%。PCNA在喉鳞癌中表达明显高于喉良性息肉和正常喉粘膜组织组。PCNA表达与临床肿瘤生长部位以及淋巴结转移有关,原发肿瘤越接近解剖上缘、淋巴转移越明显则PCNA表达越强。PCNA表达与患者性别、年龄、病理分级及临床分期无关。 结论:⑴Survivin在人喉鳞状细胞癌中呈高表达,且表达水平高于喉良性息肉以及正常喉粘膜。⑵Survivin在人喉鳞状细胞癌中的表达与肿瘤生长部位、临床分期以及淋巴转移有关,原发肿瘤越接近解剖上缘、临床分期越早、淋巴转移越明显则Survivin表达越强,与患者性别、年龄、病理分级等无关。⑶PCNA在人喉鳞状细胞癌中有较高表达,表达水平高于喉良性息肉以及正常喉粘膜。⑷PCNA在人喉鳞状细胞癌中的表达与肿瘤生长部位、淋巴转移有关,原发肿瘤越接近解剖上缘、淋巴转移越明显则PCNA表达越强,与患者性别、年龄、病理分级、临床分期等无关。