肝细胞肝癌中E2f-3、Bcl-2的表达及意义

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:douliangster
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前言 在我国,肝细胞性肝癌是恶性度最高的肿瘤之一,死亡率在恶性肿瘤中排第二位。严重威胁人类的健康和生命。目前,关于肝细胞癌的确切病因学尚不清楚,现在对于E2f转录因子及Bcl-2凋亡抑制基因的研究成为新的热点。E2f转录因子能够调节众多控制细胞增殖的基因表达,包括原癌基因和细胞周期相关基因。E2f转录因子对细胞的生长具有正调控或负调控两种作用,这两种作用具有组织特异性。因此E2f转录因子是癌基因还是抑癌基因,目前有许多争论。Bcl-2是B细胞淋巴瘤/白血病-2基因的产物,Bcl-2家族是通过线粒体调节细胞凋亡的主要因子。Bcl-2可以抑制细胞凋亡,有利于细胞生存而诱发肿瘤。目前对于E2f转录因子,Bcl-2在肝细胞性肝癌中的作用及相互关系国内尚无报道。 材料和方法 一、标本来源 肝细胞肝癌病例全部来自1992-2001年间中国医科大学第二临床医院普外科住院患者,共74例,男61例,女13例,年龄20-75岁,平均47.5岁。HE染色证明为肝细胞肝癌,均带有癌旁组织。按Edmondson分级法:Ⅰ级24例、Ⅱ级26例、Ⅲ级15例、Ⅳ级9例。以上标准确定采用两人双盲法阅片进行病理分级。取肝硬化患者15例,均来自中国医科大学附属第二临床医院,经过HE染色证明为肝硬化。 二、主要材料 鼠抗人EZf-3在cl-二单克隆抗体购自美国Cruz公司。免疫组化SP. DAB试剂盒购自福建迈新公司。 三、免疫组化染色 O)每例标本取两张石蜡片,常规脱蜡至水。p赐-二单克隆抗体需浸人 0.01 moUI拘椽酸钠缓冲液汀H6.0)中高温高压进行抗原修复。门)过氧化物酶阻断液阻断内源性过氧物酶的活性,37℃温箱孵育30分钟。K)兔非免疫血清37℃温箱2小时。(5)滴加 EZf-3、BCI-2单克隆抗体,37 T温箱 2 /J’时。(6)滴加兔抗鼠I钟,37℃温箱30分钟。()滴加 SP复合物,37℃温箱30分钟。门)新鲜配制的DAB显色液显色后用苏木素稍衬染、脱水、透明、封片。(上述步骤未加说明者,皆为室温条件)染色同时用 PBS代替 EZf-3人-2单克隆抗体作为空白对照。 四、统计学方法 采用X‘检验及相关分析方法。 结 果 EZf-3的表达定位于细胞浆及细胞核中为棕褐色颗粒,呈局灶或弥漫性分布。肝细胞肝癌组织中EZf-3阳性率为78.4%,癌旁组织中为28.4呢,二者比较差异有显著意义u<O.05厂肝细胞肝癌中EZf-3阳性率为78.4%,肝硬化组织中为26.7%,两者比较有显著意义沙<O.05人匝卜3表达与肿瘤分级泪瘤体积有关(P<O.05X而与患者性别、表面抗原是否阳性J瘤数目J瘤是否有被膜0瘤分型、有无癌栓以及*呷无关u>o.05八BCI-2的表达定位于细胞浆中,为黄褐色颗粒,呈局灶性或弥漫性分布。肝细胞肝癌组织中仇-2阳性率为79.2%,癌旁组织中为24.3啪,二者比较差异有显著意义汀<0.05人肝细胞肝癌组织中BCI-二阳性率为79.2%,肝硬化组织中为66.7%,,两者比较 ·2·差异无显著意义(P>0.05人 BCI-2的表达与肿瘤分级J瘤的体积J瘤的数目有关(P<0.05X而与性别、表面抗原是否阳性。肿瘤是否有被膜J瘤分型斤无癌栓以及*呷无关汀>0.05八在这74例肝细胞肝癌病例中,对同一例标本的EZf-3及BCI-2表达的评分结果进行相关分析。结果为 r=0.5874,t<0.05,A二4.02,B二0.55,说明两者之间有一定的相关性。 讨 论 EZf转录因子最初被发现是由于其对腺病毒EZ起动子的转录活化作用,现已发现5个不同的EZf家族成员,从EZf-l到EZf-5,EZf家族成员具有高度的同源性,它们的功能基本相同,仅是DP结合蛋白具有特异性。在GI期和S期发挥重要作用的一系列基因的上游,均含有EZf结合位点的同源序列。EZf靶基因包括细胞DAN合成及细胞周期进程的限速调解剂、癌基因,并且它还可以诱导细胞凋亡。因此,EZf在肿瘤发生中的作用及机制有许多争论。有人研究报道 EZf’蛋白可致癌,如 EZf高度表达可引起大鼠胚胎成纤维细胞转变成肿瘤细胞,同时在胃癌、结肠癌、多发性骨髓瘤、肺神经内分泌肿瘤、恶性何杰森氏病等人类恶性肿瘤中均有报道EZf高度表达。但最近有人报道缺失EZf功能的小鼠*个月内胸腺和淋巴结明显增大,这种增大显示是由于缺失正常的细胞凋亡所引起的,并且肿瘤的发生率明显增加,这说明EZf对肿瘤的发生具有抑制作用。同时有人发现EZf能够导致胶质瘤细胞和头颈肿瘤细胞凋亡,因此用人认为EZf有抑癌作用。现在推测是由于细胞所处的环境不同所致。通过本实验发现EZf-3在肝癌细胞中高度表达,而在癌旁组织、肝硬化中低表达,并且与肿瘤分级J瘤体积有关。说明EZf-3的表达对肝癌的发生起促进作用,EZf-3在肝癌中发挥癌基因作用。 ·3· BCI-2是 B细胞淋巴瘤/白血病-2基因,BCI-2家族是通过线粒体调节细胞凋亡的主要因子。迄今已发现17个伽
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