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背景谷氧还蛋白-3(Glutaredoxin 3,GLRX3),是谷氧还蛋白家族中的一员,该家族是以谷胱甘肽作为辅助因子,参与一系列的氧化还原反应的一类氧化还原酶。GLRX3基因在乳腺癌、结肠癌及肺癌中过表达,因而被认为是潜在的癌基因。我们课题组前期发现,与正常鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽部非癌组织相比,GLRX3基因在鼻咽癌细胞系和鼻咽癌组织中高表达,结果具有统计学意义;体外功能实验提示,敲除GLRX3基因可抑制鼻咽癌细胞系HONE1的生长、迁移和克隆形成。综合以上结果,我们初步提出,GLRX3在鼻咽癌中可能是一个候选的肿瘤基因。目的在前期工作基础上进一步研究GLRX3基因在鼻咽癌发生发展中扮演的角色。我们在GLRX3同样高表达的鼻咽癌细胞株CNE2上建立稳定敲除GLRK3基因的细胞株CNE2-KDGLRX3(命名为:GLRX3-KD),探讨GLRX3基因在鼻咽癌细胞CNE2中的生物学功能;再通过免疫组化验证GLRX3在鼻咽癌组织、癌旁粘膜组织及鼻咽粘膜慢性炎组织中的蛋白表达情况,比较其在组织中表达的差异性,并分析其表达与临床参数的关系,从而阐述GLRX3在鼻咽癌发生发展中可能起的作用,并验证其可能是一个肿瘤基因的科学假设。方法1、用RNA干扰技术构建4个靶向GLRX3基因的逆转录病毒载体,并将其转染入PA317,收集病毒液以感染鼻咽癌细胞株CNE2,然后筛选出敲除效率最高的3组细胞克隆,通过生长抑制试验、克隆形成实验、迁移运动试验、体外细胞侵袭实验及裸鼠体内成瘤实验来检测GLRX3基因在CNE2细胞中的肿瘤生物学功能。2、收集2013年间广西医科大学第一附属医院病理科存档的30例鼻咽粘膜慢性炎组织蜡块,59例鼻咽癌组织蜡块及其相应的癌旁粘膜组织46例,并收集鼻咽癌患者的临床资料。3、采用免疫组织化学法(Immunohistochemical,IHC)对上述蜡块组织切片进行GLRX3蛋白染色,比较其在鼻咽癌组织、癌旁粘膜组织及鼻咽粘膜慢性炎组织中的表达情况,了解GLRX3蛋白在鼻咽癌细胞中的定位,分析其表达情况与临床参数之间的联系,初步探讨GLRX3参与鼻咽癌发生发展的机制。结果1、成功构建GLRX3表达缺失的细胞株GLRX3-KD-3、GLRX3-KD-4,且相对于空白对照组细胞CNE2,GLRX3-KD组的克隆形成能力、迁移运动能力、增殖能力、迁移侵袭能力及裸鼠体内成瘤能力均显著降低。2、患者组织免疫组化结果:GLRX3定位于细胞浆,其在鼻咽癌中的表达明显高于癌旁粘膜组织(P=0.000),统计学分析提示GLRX3蛋白的表达与患者的性别、年龄、临床分期及淋巴结转移等无相关关系。结论1、GLRX3蛋白在鼻咽癌组织中高表达。2、敲除GLRX3基因可抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为。3、GLRX3是鼻咽癌候选的癌基因。