猪圆环病毒病(PCVD)正严重危害世界养猪业,其主要病原是猪圆环病毒2型(PCV2)。PCV2引起仔猪免疫抑制是众多细胞因子分泌紊乱的结果。猪肺泡巨噬细胞(PAMs)是重要的免疫细胞,也是PCV2的主要靶细胞。了解PCV2引起PAMs分泌细胞因子的变化及其调控途径可为阐明PCV2致病机制奠定基础。试验选取了20头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原抗体均为阴性的30日龄断奶仔猪,无菌分离肺泡巨噬细胞(PAMs),分为四组进行体外培养：对照组,MyD88干扰组(干扰组),PCV2感染组(PCV2组),MyD88干扰-PCV2感染组(干扰-PCV2组)。用小干扰RNA(siRNA)方法干扰MyD88基因的表达,并分别于PCV2作用后0 h、6 h、12 h、24 h和48 h收集细胞及培养上清液。荧光定量PCR法检测干扰效率；ELISA方法检测培养上清液中IL-1β、IL-6和IL-10的动态变化;间接免疫荧光(IFA)的方法检测NF-κB/P65蛋白核易位的情况；western blot和法检测胞核中NF-κB蛋白以及细胞浆内MyD88、p-IκB和NF-κB/P65蛋白的表达；EMSA方法检测胞核中NF-κB与DNA结合活性。结果显示,对体外培养PAMs分泌IL-1β、IL-6的能力,在PCV2作用后6 h和12 h均有明显的促进作用,12 h后虽然IL-1p的分泌量仍明显高于对照组,但已呈下降趋势,而12 h后IL-6的分泌已恢复到对照组水平。在体外培养12 h前,PCV2对PAMs分泌IL-10基本无影响,12 h后逐渐升高,且显著高于对照组。说明PCV2能明显促进体外培养PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10。间接免疫荧光和western blot结果可见PCV2感染6 h后,PAMs胞核中NF-KB/P65蛋白的表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)；EMSA结果表明,PCV2组与对照组相比NF-κB与DNA结合活性,PCV2感染后12 h均极显著升高；PCV2感染PAMs后6 h,胞浆中P-IκB蛋白的表达量就显著升高(P<0.05),12 h后差异显著性水平均为P<0.01,而对照组间未发现明显差异.PAMs中MyD88表达量,PCV2组从6h开始均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结果表明,PCV2能通过IκB的磷酸化降解上调PAMs中MyD88-NF-KB信号蛋白的表达,同时伴随IL-1β、IL-6和IL-10分泌增多。siRNA的结果,siRNA能使PAMs中78%的MyD88基因沉默,并显著影响其蛋白表达。MyD88基因沉默后的PAMs再用PCV2作用(干扰-PCV2组),IL-1β、IL-6和IL-10的分泌量均显著低于同时间PCV2组(P<0.05或P<0.01)。PAMs胞核中NF-κB/P65蛋白表达量,干扰-PCV2组虽然也有所升高,但12h后均显著低于PCV2组(P<0.05或P<0.01)；干扰-PCV2组PAMs胞核中NF-κB与DNA结合活性,在24 h和48 h显著低于PCV2组(P<0.01)；PAMs胞浆中Iκ,-B的磷酸化水平(p-IκB蛋白表达量),12 h后干扰-PCV2组均显著低于PCV2组(P<0.01)；干扰-PCV2组PAMs中MyD88表达量较低,且在12 h、24 h、48 h显著低于PCV2组(P<0.01)结果说明,一旦将PAMs中MyD88基因沉默后,PCV2通过上调IκB的磷酸化降解激活NF-κB信号途径的作用就下降,与此同时PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10量就随之降低。综上所述,PCV2可通过激活MyD88-NF-κB信号途径调节体外培养PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10的能力。