抗Ghrelin DNA口服酿酒酵母的构建及其效果的评价

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xinmo2009
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自2001年Steinman等人发现酿酒酵母可激活DCs并引发特异性细胞免疫反应的现象以来,研究者开始将目光集中到利用重组酵母进行口服疫苗的开发。大量研究表明Ghrelin在机体食欲、体重和脂肪代谢等生理活动的调解中发挥着重要作用,尤其在促进机体进食过程中发挥重要作用。研究表明,Ghrelin含量减少会降低食欲从而影响动物体的体重,同时有研究表明机体内的Ghrelin含量降低不会影响小鼠生长机能。因此近年来通过降低Ghrelin含量来降低动物体重进而达到减肥效果的思路逐渐受到广泛关注。本研究以本团队开发的酵母免疫系统为基础,构建了可应用到该免疫系统的Ghrelin基因真核表达载体JMB84-CMV-Ghrelin和融合表达鸡卵清白蛋白基因(OVA)的真核表达载体JMB84-CMV-OVA-Ghrelin,之后使用酿酒酵母JMY1成功构建两种口服免疫酵母。实验中,以空载体组和PBS组作为对照组,不同的口服重组酵母组作为实验组,分别命名为JMB84-CMV-Ghrelin组和JMB84-CMV-OVA-Ghrelin组,按实验室完善的实验方案进行口服饲喂实验,56天后,JMB84-CMV-OVA-Ghrelin组的小鼠日均采食量最低,体重的相对生长最小,说明了该重组酵母发挥作用会降低机体内Ghrelin的含量,进而使小鼠食欲降低,能量消耗变多,体重降低。此外,我们还构建了可用于原核表达的pET32a-Ghrelin载体,后续的研究我们将会以原核表达的Ghrelin蛋白为抗原,对各实验组的抗体产生情况进行检测。综上所述,本研究成功构建了两种Ghrelin基因的真核表达载体,并将该真核表达载体转化进入酿酒酵母成功构建两种口服重组免疫酵母,此外,我们还通过动物活体实验对两种重组酵母的免疫效果进行了研究,发现OVA-Ghrelin融合表达的免疫效果优于Ghrelin单独表达。本研究为治疗病人肥胖病提供了一种新的思路,为后续该系统的进一步深入研究奠定了良好的基础。
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