目的:纯化重组的sgp130原核表达蛋白,用于制备sgp130蛋白单克隆抗体,检测抗体与sgp130蛋白的结合效果。观察sgp130蛋白对酒精和四氯化碳联合构建的肝硬化C57BL/6小鼠模型和二乙基亚硝胺(DEN)诱导的ICR小鼠肝硬化模型的治疗作用。方法:将构建好的原核表达菌株pET-28a-sgp130-Rosseta(DE3)活化,进行sgp130蛋白的诱导表达和纯化。EDTA抗原修复液热修复蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,采用ELISA和western-blotting相结合的方法进行单抗的筛选和评估。用亚型鉴定试剂盒通过ELISA法测定单抗亚型。用酒精和四氯化碳联合构建肝硬化C57BL/6小鼠模型和DEN诱导的ICR小鼠肝硬化模型,将纯化好的sgp130蛋白分别尾静脉注射到两组肝硬化模型小鼠体内,治疗结束后采用天狼猩红染色、HE染色和免疫组化等方式检测肝脏病理变化。结果:1.成功表达和纯化sgp130蛋白,免疫小鼠3次后Balb/c小鼠血清效价均达到1.25 X1 05。2.sgp130杂交瘤细胞融合成功,经过2次克隆化培养后获得1株western-blotting结果显示为特异性良好、无背景染色的单克隆细胞株。3.亚型鉴定结果显示抗体重链亚型为IgGl,轻链亚型为K型。4.小鼠解剖、肝脏HE染色和天狼星红染色结果显示,其肝脏质地均匀,包膜光滑、纤细,肝脏的纤维化程度显著降低,肝脏损伤明显减轻。5.小鼠肝脏组织免疫组化检测显示,注射sgp130蛋白小鼠的肝脏Ki67、PCNA表达量明显降低。结论:筛选获得的特异性强、亲和力高的sgp130单克隆抗体,其在western-blotting检测中具有良好的效果。sgp130蛋白通过与gp130蛋白竞争结合IL-6/IL6Rα复合物,抑制IL-6激活的反式信号通路,减轻炎症反应的程度。静脉注射sgp130,不仅可以减轻由酒精和四氯化碳联合诱导的肝脏纤维化,还能减轻由DEN和四氯化碳(CC14)诱导的肝脏损伤。