论文部分内容阅读
研究背景和目的:卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,尽管其在女性全部肿瘤中所占比例不高,但由于缺乏早期临床症状致使其发现较晚,导致其致死率长期居高不下,严重威胁女性健康。上皮性卵巢癌中的浆液性癌是最常见的卵巢恶性肿瘤,而其中高级别浆液性癌又是致死率最高的。microRNA (miRNA)是一类具有调控作用的非编码RNA分子。miRNA在多种生物学过程中起到调节作用,如细胞周期、分化、增殖、凋亡和血管生成。miRNA与癌症的关系最初是在白血病中发现的。此后,在多种癌症中都发现了miRNA的异常表达。miRNA主要通过碱基互补配对的方式识别靶基因并对其进行调节。同—miRNA可以调节多个基因,而同一基因又可受到多个不同miRNA的调节。miR-1236-3p的碱基序列为5’-ccucuuccccuugucucuccag-3’,关于此miRNA的报道较少,目前已知其主要参与了VEGFR-3和TLR4的调节。ZEBl为上皮一间质转化(EMT)的转录因子之一,EMT为促进上皮性癌细胞发生转移的较为关键的步骤。EMT为上皮细胞经过多种生物化学变化获得间充质细胞生物学特性的过程,在这一过程中细胞形态由鹅卵石样变为梭形,细胞表面黏附分子减少,细胞黏附能力下降,侵袭迁移能力增加,促进癌细胞发生转移。EMT发生的较经典的分子水平变化是E-cadherin增多,N-cadherin减少。迄今为止,尚未有研究证明miR-1236-3p可影响卵巢癌细胞的侵袭迁移能力。本文旨在检测miR-1236-3p在卵巢高级别浆液性癌与正常输卵管伞端上皮中的表达差异,并探究miR-1236-3p对卵巢癌细胞侵袭迁移能力的影响及其具体作用机制。研究方法:(1)测定卵巢高级别浆液性癌患者癌组织与正常输卵管伞端上皮组织中miR-1236-3p的表达:应用软件设计特异性引物,RT-PCR技术检测miR-1236-3p的表达。(2)侵袭和迁移实验:利用细胞转染技术分别升高和降低miR-1236-3p在卵巢癌细胞(A2780和SKOV3)中的表达,然后应用侵袭和迁移实验检测癌细胞侵袭迁移能力的改变。(3)双荧光素酶报告载体构建:设计引物,,扩增ZEB13’UTR序列并将其连入荧光素酶报告载体,使用荧光素酶报告试剂盒检测细胞的荧光活性。(4) Western blot和RT-PCR:在卵巢癌细胞(A2780和SKOV3)中转染miR-1236-3p mimics和inhibitors,48小时后,收集细胞测定细胞内ZEB1、 E-cadherin、N-cadherin在蛋白水平和mRNA水平的表达情况;Western blot测定卵巢高级别浆液性癌和正常输卵管伞端上皮组织中的ZEB1蛋白的表达水平。研究结果:(1) MiR-1236-3p在卵巢高级别浆液性癌中的表达明显低于正常输卵管伞端上皮组织。(2)功能性实验证实,与对照组相比较,miR-1236-3p明显影响卵巢癌细胞的侵袭迁移能力,且会影响癌细胞的形态。(3)双荧光素酶报告基因检测系统证实,miR-1236-3p直接结合于ZEB1mRNA的3’UTR并抑制其蛋白表达,ZEB1为miR-1236-3p的靶基因。(4)在mRNA水平和蛋白水平,miR-1236-3p可调控基因ZEB1及其下游基因E-cadherin和N-cadherin的表达。(5)在卵巢高级别浆液性癌组织中ZEB1在蛋白水平明显高表达,这与组织中miR-1236-3p低表达相一致。结论:(1)在HG-SOC组织中,miR-1236-3p具有肿瘤抑制作用,且组织中miR-1236-3p与ZEB1蛋白的表达负相关。(2) miR-1236-3p通过调控ZEB1影响卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。