北京棒杆菌邻氨基苯甲酸合成酶基因的克隆、序列分析及表达

来源 :中国科学院微生物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:funfzitm
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
采用生长谱法确定了北京棒杆菌PD-67(Corynebaototium pekinense PD-67)的营养缺陷型为L-苯丙氨酸的完全缺陷型和L-酪氨酸的不完全缺陷型,并通过液体摇管法确定了最适于该菌株生长的L-苯丙氨酸和L-酪氨酸的浓度。在此实验结果基础上,经摇瓶培养确定了C.pekinease PD-67的种子及发酵基本培养基。   以C.pekinense野生株AS1.299和突变株PD-67的基因组为模板,用PCR方法扩增了邻氨基苯甲酸合成酶(anthranilate synthetase EC4.1.3.27,AS)基因(trpEG)片段和前端控制序列。核酸序列分析结果表明,该片段全长3374bp,包含三个ORF,推测分别为前导肽基因trpL、AS component I基因trpE和AScomponent II基因trpG。C.pekinense野生株As1.299与突变株PD-67相比较,trpL基因完全一样;trpE基因有6个碱基的突变,导致了5个氨基酸残基的改变;trpG基因有一个碱基的突变,导致了1个氨基酸残基的改变;同时它们在-35序列处还有一个A→G的突变。通过同源性比较发现,C.pekinense AS1.299与Corynebacterium glutamicum ATCC13032和Brevibacterium lactofermentum的亲缘关系是很近的。trpL基因上游存在启动子区域,并能被Escherichia coli的RNA聚合酶所识别,实现异源互补。   对C.pekinense AS1.299和PD-67进行了L-色氨酸反馈抑制和反馈阻遏实验,实验结果表明C.pekinense PD-67的AS解除了反馈抑制和反馈阻遏控制。   野生型和突变型AS基因在C.pekinense AS1.299和PD-67中都得到表达,并且重组菌的酶活相对于宿主菌都有了很大提高。PD-67(pJW1)比PD-67的酶活提高了近55倍,PD-67(pJw3)比PD-67的酶活提高了近9倍,而AS1.299(pJW1)和AS1.299(pJW3)也有可检测出的酶活。   重组菌摇瓶发酵实验结果表明,带有突变型AS基因的PD-67重组菌生长比较慢,稳定期比PD-67推迟24个小时,但产生的L-色氨酸比PD-67高22.39%;带有野生型AS基因的PD-67重组菌在稳定期有最大的生物量,但产生的L-色氨酸比PD-67低32%。这说明AS酶活高低对L-色氨酸的产量有很大影响。
其他文献
本文通过对荣华二采区10
期刊
学位
随着能源危机和环境恶化的日益加剧,发展可再生新能源已经成为世界各国的共识。其中,风能以清洁无污染、资源丰富、技术应用成熟以及市场前景广阔等优点在新能源中脱颖而出。风力发电是风能的最主要利用方式,目前已受到人们的广泛关注。直驱永磁同步风电机组以无需外部励磁、结构简单、转换效率高、维护成本低、利于电网安全稳定运行等优点,成为了当前兆瓦级风电系统的主流机型。为实现永磁风力发电机的高性能控制,转子位置和转
随着能源危机的加重和环境污染问题的日益突出,人们对可再生新能源的寻求极为迫切。太阳能作为一种绿色的可再生能源,具有储量大、分布广泛、清洁环保等优点,其开发利用得到了世
秋海棠属单裂组是一个亚洲分布组。本文对该组的中国产种类进行了分类学、形态学、细胞学、繁殖生物学、传粉生物学和雌雄配子体发育等方面的研究,探讨了以球茎种类为主的国产
随着当代工业的蓬勃发展,交流电机在工业生产中扮演着越来越重要的角色,因此,变频调速技术也越来越受到人们的重视。但是我国在变频调速领域相比于国外还有不小的差距,尤其是变频器产品,我国还无法做出像国外那样成熟的矢量变频器产品。因此,研究基于直接转矩控制(DTC)的交流变频器样机具有相当大的实用价值。本文首先分析了交流异步电机和电压型逆变器的数学模型,并分析了传统DTC系统在低速时的性能,指出了影响传统
随着全球一次能源危机日益加重和环境污染越来越严重恶化,绿色可再生能源的利用逐渐被关注,使能够缓解能源与环境的带来的巨大压力,其中光伏发电系统以其无污染、低噪声、资源丰
在回收商可以自主选择电子废弃物回收处理的环保程度的基础上,分别研究消费者与回收商、政府与回收商的两个双阶段动态博弈模型,得到了回收商的最优环保处理系数、消费者最优
基因扩增是癌基因活化的主要方式,癌基因扩增及过表达与肿瘤发生、演进及预后密切相关。同时,基因扩增与肿瘤细胞的耐药现象关系密切。我们的前期工作证实,在人卵巢癌细胞系UACC
当今世界,尤其是发展中国家,正经历着一场前所未有的城市化浪潮。城市化作为土地利用/覆盖变化的主要人类驱动力之一,对全球环境产生了深刻影响。利用景观格局分析的方法研究城