论文部分内容阅读
目的:本研究旨在研究CML对小鼠脑损伤作用及机制。方法:3-4周龄CD-1小鼠,雌雄各半,分为四个组:普通对照组,200 mg/kg剂量组,500 mg/kg剂量组,1000 mg/kg剂量组。进行经口28天重复染毒小鼠,染毒完成后禁食1-2 h,处死。制作脑组织病理学切片,测定脑组织丙二醛(MDA)的含量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;采用实时荧光定量PCR测定脑组织中IL-6,TNF-α、TGF-β、VCAM-1、RAGE、ap-1、P38基因表达;Western Blot测定脑组织中RAGE蛋白和P38蛋白表达水平。将HT22细胞分为五组,分别加入含终浓度为0.05 mg/m L,0.1 mg/m L,0.2mg/m L,0.5 mg/m L的CML的细胞培养液,待染毒结束后处理。染毒24小时后,cck-8法测定CML对HT22细胞存活率的影响;实时荧光定量PCR测定IL-1、IL-6,TNF-α、TGF-β、VCAM-1、RAGE、ap-1、NF-κB p65 m RNA表达情况;免疫荧光细胞化学法测量NF-κB活性。结果:通过组织病理切片,可见染毒组小鼠神经元细胞体积明显缩小、细胞深染与皱缩;各剂量组T-SOD、GSH-Px与对照组相比,均有不同程度下降,MDA含量与对照组相比有所提高;染毒组小鼠脑组织中RAGE、AP-1、炎症因子IL-6、TNF-αm RNA的表达水平高于对照组,导致生长因子TGF-β、细胞粘附分子VCAM-1表达升高;染毒后,RAGE的蛋白表达量较对照组显著升高。染毒24小时之后,随着CML染毒剂量的增高,各染毒组细胞的存活率对照组均不同程度降低,差别具有统计学意义(P<0.05);各染毒组细胞RAGE、p38、AP-1、炎症因子IL-1、IL-6、TNF-αm RNA的表达水平高于对照组,导致生长因子TGF-β、细胞粘附分子VCAM-1表达升高。0.2mg/kg组和0.5mg/kg组NF-κB的活性较对照组显著升高(P<0.05)。结论:本实验条件下CML对小鼠脑组织产生炎症效应,对小鼠海马神经元细胞有明显的毒性作用,表现为HT22细胞的凋亡。