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目的
理论研究:综述中医学对男性免疫性不育的认识、实验研究及现代医学进展。论述男性免疫性不育的辨体论治思想,为本病的治疗提供新的思路。
实验研究:以SD大鼠同种精子制备抗原,人工主动免疫法建立AsAb阳性大鼠模型,通过对附睾精子凋亡的相关基因、睾丸组织形态、MDA、SOD、NO及NOS活性等方面的系统研究,探讨中药改善AsAb阳性大鼠附睾精子凋亡的作用及其相关机制。
方法
理论研究:论述男性免疫性不育的形成与过敏体质的关系,阐明男性免疫性不育的体质特征。依据男性免疫性不育的辨体论治原理,确立男性免疫性不育症的辨体论治原则,制定男性免疫性不育的辨体论治方剂过敏康Ⅱ号胶囊。
实验研究:60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,对照组,过敏康Ⅱ号胶囊高、中、低剂量组。人工主动免疫法造模成功后分别以相应药物灌胃30天。给药结束后处死动物取材,检测以下指标:
(1)酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清AsAb;CASA观察过敏康Ⅱ号胶囊给药后实验动物的精子运动能力变化。
(2)HE染色观察给药后实验动物睾丸组织形态的变化。
(3)TUNEL,法观察实验动物附睾精子凋亡率的变化。
(4)黄嘌呤氧化酶法检测附睾组织超氧化物歧化酶;硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛。
(5)硝酸还原酶法检测一氧化氮及一氧化氮合酶。
(6)免疫组织化学染色法观察过敏康Ⅱ号胶囊给药后对实验动物睾丸组织凋亡相关基因Bc1-2、Bax表达的影响。
结果
理论研究:过敏体质的形成不仅是先天禀赋的,同时也是后天获得的,受自然环境、社会生活等方面综合作用的结果。男性免疫性不育是在内外致病因素作用下导致的病理改变,机体内环境失稳和适应性调节功能失常,即体质禀赋异常是其根本。男性免疫性不育的体质特征为气虚卫表不固,血热易于风动,素禀不耐异气之邪为患。
个体体质具有可调性,男性免疫性不育症的辨体论治是通过改善过敏体质,调节机体免疫机能,将过敏原(精子)与机体的不良免疫反应降到最低限度。辨体论治方剂过敏康Ⅱ号胶囊具有益气固表、凉血消风、改善特禀体质的功效。
实验研究:
(1)模型大鼠AsAb均呈阳性,且模型组AsAb吸光值(OD值)明显高于正常组。模型大鼠附睾组织SOD活性降低,MDA、NO活性及NOS含量均增高。模型大鼠附睾精子细胞凋亡率明显上升。AsAb阳性大鼠睾丸Bc1-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显增多。
(2)与模型组相比,过敏康Ⅱ号胶囊治疗后大鼠AsAb均显著降低;AsAb阳性大鼠精子活力、活率和密度显著升高。
(3)与模型组相比,过敏康II号胶囊治疗后大鼠睾丸组织形态得以改善。
(4)与模型组相比,过敏康Ⅱ号胶囊治疗后附睾精子凋亡率显著降低。
(5)与模型组相比,过敏康Ⅱ号胶囊治疗后附睾组织SOD含量显著升高,附睾组织MDA含量显著降低。
(6)与模型组相比,过敏康Ⅱ号胶囊治疗后附睾组织NO及NOS活性显著降低。
(7)与模型组相比,过敏康Ⅱ号胶囊治疗后睾丸生精细胞和精子Bc1-2表达的平均吸光值显著高于模型组,而Bax表达的平均吸光值显著低于模型组。
结论
理论研究:过敏体质的形成不仅是先天禀赋的,同时也是后天获得的。男性免疫性不育体质禀赋异常是其根本。个体体质具有可调性,治疗男性免疫性不育症的关键是改善过敏体质。
实验研究:模型大鼠AsAb均呈阳性,附睾精子细胞凋亡率明显上升。与正常组比较,附睾精子凋亡的相关基因、睾丸组织形态、SOD、MDA、NO及NOS活性等方面均有显著差异。成功建立AsAb阳性大鼠模型。
过敏康Ⅱ号胶囊各剂量组对大鼠AsAb均有治疗作用,证实过敏康Ⅱ号胶囊确有免疫抑制作用。且可以改善睾丸组织形态,提高精子运动参数。过敏康Ⅱ号胶囊可抑制AsAb阳性大鼠附睾精子的凋亡,其机制与过敏康Ⅱ号胶囊能显著降低大鼠附睾组织内异常升高的MDA、NO、NOS水平,升高SOD活性,改善精子的抗氧化作用,清除AsAb阳性大鼠精子过量生成的氧自由基,从而抑制精子凋亡有关。调节睾丸Bc1-2、Bax的表达是过敏康Ⅱ号胶囊清除或抑制AsAb的作用机制之一。