论文部分内容阅读
本论文第一部分首先合成酶催化反应的底物,N-乙酰-DL-2-氨基丁酸、DL-2-氨基丁酸甲酯盐酸盐和DL-2-氨基丁酰胺盐酸盐,并进行了结构确认。接着探索了L-氨基酰化酶催化三种底物的对映选择性水解,并对L-氨基酰化酶催化水解N-乙酰-DL-2-氨基丁酸合成L-2-氨基丁酸进行了系统的研究。通过单因素试验研究了各种条件对于酶的催化活性的影响,其中包括底物浓度、缓冲溶液pH值、温度、加酶量、反应时间等。实验结果显示酶的最适反应条件如下：底物浓度为0.01mol/L,加酶量为100U,pH为7.5、10ml的50mM Tris-HCl缓冲溶液,反应温度30℃,反应时间4h。在此条件下通过酶拆分法制备的手性L-2-氨基丁酸转化率为48.6%,e.e值达到98.9%。本论文第二部分研究了磁性材料固定化L-氨基酰化酶。第一种方法是使用壳聚糖和磁性四氧化三铁制备成壳聚糖包裹四氧化三铁的磁性材料作为固定化酶的载体,加入交联剂戊二醛进行交联,将L-氨基酰化酶固定在磁性材料上。第二种方法是利用海藻酸钠、磁性四氧化三铁和L-氨基酰化酶,制成海藻酸钙包裹L-氨基酰化酶和四氧化三铁的磁性微球。通过比较交联法与包埋法制得的固定化酶活性,发现包埋法制得的固定化酶活性较高,达到游离酶的82.8%,而交联法只有14.7%。对包埋法的各项实验条件进行优化,确定最佳的固定化条件,并对固定化酶的性质进行了初步的研究。发现固定化酶的pH稳定性与游离酶相差不大,但热稳定性比游离酶有了显著提高。固定化酶重复利用5次后,酶活性仍保持初始活性的51.9%。