多星韭(Allium wallichii Kunth)B染色体特异序列的RAPD筛选

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B染色体是不与物种常染色体发生重组、非孟德尔遗传的、异染色质化的非必需的一类染色体。至今,在近2000多种生物中发现了B染色体的存在,其中包括动物、植物以及真菌等有机体。B染色体可能在物种进化、遗传育种方面具有很重要的意义,还可能是研究细胞分裂中调节染色体行为的内在机制的好材料。多星韭居群中含有较高比例的B染色体,并且多星韭二倍体仅有14条染色体,数量少,染色体大,因而是研究B染色体的一个好材料。   本实验以澄江梁王山的多星韭为材料,取根最前端进行显微镜镜检,筛选出同一植株不同根尖所含B染色体数目不同的个体;将根的其余部分编号并用硅胶干燥,干燥后用CTAB法提取DNA,然后运用RAPD技术对筛选出来的多星韭进行检测,筛选特异条带并回收。   实验结果得出,67、72、83号植株符合我们的实验条件。通过优化反应体系和反应条件,对植株72和83进行RAPD分析,最后得到B1485-400和bB1485-2200两条特异序列,由于B1485-400比较短,没有进行回收,只回收了B1485-2200。   本实验所用的DNA模板是来自于同一个植株,也就是说他们的常染色体的遗传背景是一致的。在整个的实验过程中尽量避免杂质DNA的混入,因此,通过RAPD得到的特异条带很可能就是B染色体上特异存在的DNA序列。有了B染色体的特异序列,就可以打破只能在某些细胞分裂时期观察到B染色体的局限,在细胞的任何状态下定位B染色体,确定B染色体的存在与否。
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