肠激酶(Enterokinase,EK)是存在于哺乳动物十二指肠内的一种异源二聚体丝氨酸蛋白酶。在pH值(4.5～9.5)、温度4～45℃范围内专一识别Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,并水解Lys后肽键。由于经EK裂解融合蛋白所释放的目的多肽具有和野生型完全一致的N末端氨基酸序列,因而可作为蛋白表达体系中融合蛋白的切割试剂。但是天然的肠激酶来源有限,价格昂贵,并且提取分离的成本高,加之天然提取的肠激酶易被其它蛋白酶污染,在切割融合蛋白的同时可能又降解了目的产物,运用基因工程方法可以弥补这些不足。本研究从新屠宰的牛十二指肠组织中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增肠激酶cDNA片段,经测序后将其克隆于pMD18-T载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确,进行全序列分析。结果表明,克隆的cDNA与GenBank上的序列完全一致。将其插入大肠杆菌表达载体pGEX-2T中,经过酶切鉴定和测序,证实其插入方向、读码框架正确,得到重组质粒pGEX-rEKL,转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达。融合蛋白通过GST-Sepharose亲和层析分离后经SDS-PAGE分析,相对分子量约为61kDa,和预期相符,在用凝血酶切断GST标签蛋白后成功的获得了轻链肠激酶的单体,为重组牛肠激酶的应用奠定了基础。