溶菌酶(lysozyme,EC3.2.1.17),又称胞壁质酶(muramidase)。根据免疫学特性、催化活性及空间结构,可以将溶菌酶分为六类。目前,国内外对溶菌酶的研究主要集中在c-型人溶菌酶以及c-型和i-型水产动物溶菌酶。研究发现,水产动物i-型溶菌酶对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有显著地抑菌效果,能够代替抗生素等抑菌产品,具有广泛的应用价值。但目前,产业化存在很大问题。实验多以大肠杆菌为表达宿主,但其表达容易出现包涵体且酶活较低。本实验将海参溶菌酶基因导入毕赤酵母中进行表达,克服了包涵体的问题,但是,蛋白表达量很低。为解决这个问题,本实验通过对海参溶菌酶基因密码子进行优化,提高表达量。本实验根据毕赤酵母特有的密码子偏好特性结合AT含量有效控制的方式改变基因,对基因密码子进行一定程度的优化并调整发酵条件来提高产量。实验中,将优化后的海参溶菌酶基因(SjLys’)经化学合成得到目的基因片段,再将带有海参溶菌酶基因的克隆载体pMD18-T-SjLys’,进行EcoRI和NotI双酶切处理,然后,构建到表达载体pPIC9K-SjLys’。新构建的表达载体转化至毕赤酵母GS115中,利用MD、MM固体培养基,筛选出具有甲醇缓慢表现型的菌株。将上述菌株,结合含1mg/mL～4mg/mLG418的YPD培养基,筛选高效表达的菌株,共256株,并具有抑菌活性。经1%甲醇诱导表达72h后,TCA沉淀处理发酵液,SDS-PAGE分析蛋白的表达,筛选出最优表达量的菌株 pPIC9K-SjLys’-8-27。本研究成功将优化的海参溶菌酶基因在毕赤酵母中得到重组表达。实验结果发现,通过对海参溶菌酶基因密码子优化后,蛋白表达量明显提高。研究为进一步研究海参溶菌酶结构与功能及其纯化奠定了基础,也为今后的大规模的工业化生产提供了依据。