马泰勒虫病是由马泰勒虫(原马巴贝斯虫)引起的蜱传播的血液原虫病的一种，感染马属动物(马、骡子、驴、斑马等)的红细胞和淋巴细胞，以急性溶血性贫血为特征。在临床上可导致马匹贫血、发热和黄疸等症状。该病的流行高峰主要在春秋两季，新疆处于独特的地理环境，蜱虫媒介种类繁多，能够频繁地传播马泰勒虫病，导致我区马匹患病率不断升高。目前尚无根治马泰勒虫病的有效药物，也没有疫苗能够提前免疫马匹，当患病马恢复正常状态也将会成为终身携带者，对本地区的马养殖产业造成较大的经济损失。我区马匹80%以上自然放牧于草原和偏僻的山区，因此其诊断技术和方法比较滞后，要确诊一个疑似病例得需要“横跨天山”将样品送至实验室进行检测确诊。因此，需要建立一种能够快速进行检测马泰勒虫病的方法，不仅对急性发病能够有效检测，而且对隐性带虫状态马匹同样可以检测的方法，可为综合防控提供技术支撑。
　　本研究致力于解决实际生产中存在的问题，在实验室已成功表达pET-28a-EMA1的基础上，构建pCMV-N-flag-EMA1重组质粒，纯化pET-28a-EMA1蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠，采用细胞培养及杂交融合技术，挑选一株稳定分泌的单克隆抗体。将pET-28a-EMA1和单克隆抗体作为基础制备一种马泰勒虫病胶体金免疫层析试纸条。利用其不需要专业的仪器设备等一系列优点可利于基层流行病学调研及相关部门的监测，及时做出一定的预防措施具有实际应用意义。
　　1.本研究在前期克隆及表达pET-28a-EMA1重组蛋白的基础上，构建真核载体pCMV-N-flag-EMA1。将纯化的pET-28a-EMA1蛋白免疫小鼠，用细胞融合技术筛选抗马泰勒虫EMA-1蛋白的单克隆抗体，用SDS-PAGE、WesternBlot和IFAT对筛选出的单抗特性分析。结果表明:筛选出一株稳定分泌抗马泰勒虫EMA-1蛋白的单克隆抗体5H2；单克隆抗体5H2与pET-28a-EMA1原核表达pCMV-N-flag-EMA1真核表达质粒转染的细胞中以及感染马泰勒虫的红细胞均发生特异性反应，效价达1:256000；重链为IgG2b，轻链为κ链。
　　2.本研究使用胶体金标记pET-28a-EMA1，将pET-28a-EMA1蛋白包被检测线，使用单克隆抗体5H2包被质控线。同时对EMA-1标记的蛋白pH值、标记的浓度、检测线包被浓度、质控线包被浓度等参数进行了选择和优化，经特异性、敏感性及批内和批间重复试验后研制胶体金免疫层析试纸条，并应用于检测采自新疆5个试验点的临床样品(N=355)，与商品化的ELISA试剂盒对比符合率。结果显示，pET-28a-EMA1蛋白最佳标记pH为7.5；最佳标记量为60μg/mL胶体金；检测线EMA-1蛋白浓度为0.5mg/mL，质控线5H2浓度为1mg/mL；待检样品直接检测，结果判定的时间为5~10min；该方法同马驽巴贝斯虫病的阳性血清无交叉反应性；将马泰勒虫病阳性血清稀释到1:8时仍然可见明显红色条带；重复稳定性结果一致；该试纸条与ELISA试剂盒检测马泰勒虫感染率分别为65%(56/92)和54%(50/92)，两种方法检测马泰勒虫抗体阳性符合率为91.3%；使用建立的马泰勒虫胶体金免疫层析试纸条该方法检测四个地区临床样品的马泰勒虫病平均阳性感染率为59%。建立的胶体金快速检测方法方便基层和大规模马匹养殖场检测马泰勒虫病，并及时实施防控措施。