【摘 要】
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piggyBac (PB)转座子系统是一个有效的遗传修饰工具,它是通过剪切-粘贴机制来发挥作用的。其作用已经在很多生物体内被证实,比如哺乳动物、昆虫和酵母。然而在绿色微藻一莱茵
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piggyBac (PB)转座子系统是一个有效的遗传修饰工具,它是通过剪切-粘贴机制来发挥作用的。其作用已经在很多生物体内被证实,比如哺乳动物、昆虫和酵母。然而在绿色微藻一莱茵衣藻体内是否有活性,却很少有人研究。为了解决这一疑问,本课题首次构建了能在莱茵衣藻体内稳定表达的PB转座子元件,并且获得了体内含有一个或多个PB转座元件的莱茵衣藻藻株。我们在含有PB转座元件的藻株内瞬时表达莱茵衣藻体内原始的转座酶和密码子优化后的转座酶,并且用限制性片段长度多态性分析手段来检测PB元件的转座效果。通过限制性片段长度多态性分析图谱上不同大小片段的消失和出现,来判别PB转座现象是否发生。通过连续接种的方法来检测转座现象是否可以持续发生。实验结果表明,将含有普通转座酶和密码子优化后的转座酶表达盒转化进入细胞体内一周和两周之后,PB元件的限制性多态性图谱会有不同程度的改变。同时我们发现非常规性的剪切会发生在短的重复序列5’-TTT-3’和5’-ACGCAG-3’,常规性的剪切位点是5’-TTAA-3’。在常规性位点发生剪切的细胞不会存活,非常规性剪切使得部分细胞能够存活下来。以上结果可以说明,在莱茵衣藻中,转座酶对细胞内PB转座元件的表达具有诱导作用。因此,PB转座系统可以用于莱因衣藻遗传修饰的研究。
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