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目的:对于高危非肌层浸润性膀胱(NMIBC)癌患者,卡介苗(BCG)膀胱灌注免疫治疗一直是标准的一线治疗方案,但是BCG免疫治疗存在很多局限。最近有研究发现雄激素受体(AR)以及雄激素信号通路在膀胱癌的发生发展过程中起着重要的作用。本研究试图联合应用BCG和抗雄激素药物,通过细胞实验和动物实验来探讨BCG和抗雄激素药物联用是否能够更好的抑制膀胱癌的进展及其作用机制。方法:1、细胞实验(1)Western-Blot检测T24细胞及253J细胞中AR的表达水平;(2)设置各实验组:单独应用BCG组,BCG联合应用抗雄激素药物羟基氟他胺(HF)组,BCG联合应用雄激素降解剂二甲基姜黄素(ASC-J9?)组,分别用上述各组处理T24及253J细胞,用普通PCR法检测膀胱癌细胞BCG的表达情况;用Q-PCR法检测膀胱癌细胞整合蛋白α5、β1的mRNA的表达情况;(3)通过细胞迁移实验验证经过不同处理的(单独应用BCG或与抗雄激素药物联用)膀胱癌细胞募集单核细胞THP-1细胞的能力:将数量大致相同的膀胱癌细胞铺到Transwell的下室中,经过BCG或者BCG联合抗雄激素药物处理后,上室中加入数量大致相同的THP-1细胞,培养2小时后收集下室培养基,计数其中的THP-1细胞数量作比较;将T24细胞及253J细胞做不同的处理后,检测了膀胱癌细胞分泌的有关免疫反应的细胞因子,如IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,CCL-2等的表达情况,对比产生的变化;(4)对THP-1细胞使用不同的实验条件处理(单独应用BCG或与抗雄激素药物联用),通过Elisa检测不同条件下THP-1细胞TNF-α的分泌情况;提取经过不同处理的THP-1的细胞培养基处理膀胱癌细胞系,使用MTT检测膀胱癌细胞的生存能力差异。2、动物实验选用BBN诱导的小鼠膀胱癌模型。具体的实验过程如下:(1)根据血尿程度将小鼠随机分为四组,分别是BCG组、ASC-J9?组、BCG+ASC-J9?、对照组,每组十只。(2)通过不同实验条件处理小鼠,处理完成后每组分别处死五只小鼠,取膀胱制成蜡块,行he染色观察小鼠膀胱上皮细胞形态,行brdu染色观察小鼠膀胱上皮细胞增殖情况,行f4/80免疫组化染色观察巨噬细胞局部浸润情况;(3)继续饲养每组剩余五只小鼠,观察其生存率的差异。结果:1、1)在t24细胞及253j细胞中,都有ar表达;使用5μmasc-j9?处理细胞后,ar的表达水平降低;2)分别用不同条件处理t24及253j细胞后,用普通pcr法检测膀胱癌细胞bcg的表达可见当bcg与hf或asc-j9?联用后,膀胱癌细胞中bcg的表达有所升高,且升高将近2倍;使用q-pcr检测膀胱癌细胞中整合蛋白α5、β1的mrna的表达可见bcg与hf或asc-j9?联用后,整合蛋白α5、β1的mrna的表达升高;3)通过细胞迁移实验可见,当bcg与hf或asc-j9?联用处理膀胱癌细胞后,可以引起更多的thp-1细胞迁移向肿瘤细胞;使用q-pcr检测使用不同条件处理膀胱癌细胞后,相关免疫分子mrna的表达情况,可见il-6的表达在bcg与hf或asc-j9?联用后升高,差异有统计学意义;4)通过elisa实验可见,用bcg与hf或asc-j9?联用处理thp-1细胞后,可使thp-1细胞分泌更多的tnf-α;提取经过不同处理的thp-1细胞的培养基,用来培养膀胱癌细胞,通过mtt可见bcg与hf或asc-j9?联用处理thp-1的培养基培养膀胱癌细胞,可使膀胱癌细胞的生存能力明显降低。2、1)通过应用he染色我们发现,对照组和asc-j9?组小鼠膀胱出现了尿路上皮乳头状癌和原位癌,bcg组小鼠膀胱切片可见少量的尿路上皮癌及少量的非典型增生,bcg+asc-j9?组小鼠仅见少量的非典型增生,很少发现膀胱癌细胞;2)与bcg组及asc-j9?组相比,对照组表达brdu的膀胱尿路上皮细胞数目最多,而bcg+asc-j9?组达brdu的膀胱尿路上皮细胞数目最少;3)与对照组相比,bcg组及asc-j9?f4/80阳性细胞数相对较多,而bcg+asc-j9?组f4/80阳性细胞数目最多;4)小鼠生存率:对照组小鼠平均生存31.12±2.28周;asc-j9?组小鼠平均生存31.83±2.36周,与对照组相比没有统计学差异;bcg组小鼠平均生存35.64±2.73周,与对照组相比差异有统计学意义;bcg+asc-j9?组小鼠平均生存39.67±3.56周,与对照组相比有统计学意义。结论:1、与单独应用bcg相比,羟基氟他胺(hf)或者asc-j9?与bcg连用提高了bcg与肿瘤细胞的接触、内化能力,从而更好地抑制肿瘤细胞生长;2、羟基氟他胺(hf)或者asc-j9?治疗增加了肿瘤细胞白介素6(il-6)的释放,从而可以募集更多的单核细胞/巨噬细胞,通过分泌更多的肿瘤坏死因子α(TNF-α)杀伤肿瘤细胞;3、在N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝基胺(BBN)所诱导的小鼠膀胱癌模型中,ASC-J9?提高了BCG抑制了膀胱癌细胞增殖的能力,延长了小鼠的生存期。