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目的评估血浆中游离DNA片段分布状态及游离DNA定量及完整性检测在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)诊疗中的应用价值,并探讨血浆肿瘤标志物游离DNA及对应血清学标志物在NSCLC诊疗中的应用价值。方法第一部分建立β-actin质粒标准品标准曲线,建立SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法。设计100 bp、183 bp、278 bpβ-actin内参基因扩增产物长度的特异性引物,定量检测104例NSCLC、30例肺良性疾病患者、30例健康对照组、术后1天及术后3周NSCLC随访患者37例、19例术后化疗随访患者血浆中三个片段游离DNA的含量,并计算各组游离DNA完整性,结合患者临床病理资料,评估游离DNA及其完整性在NSCLC诊疗中的应用价值。第二部分设计癌胚抗原(Carcinoma embryonic antigen,CEA),细胞角蛋白19片段(Cytokerantin-19-fragment CYFRA21-1)对应目的基因CEA、KRT19的特异性引物,定量检测95例NSCLC、30例肺良性疾病患者、30例健康对照组、术后3周NSCLC随访患者37例、19例术后化疗患者随访血浆中CEA及CYFRA21-1对应游离DNA(CEA-cfDNA、KRT19-cfDNA)的含量,并检测患者血清中CEA、CYFRA21-1、hs-CRP含量,结合患者临床病理资料,分析其在NSCLC诊疗中的潜在应用价值。结果第一部分(1)成功建立β-actin质粒标准品标准曲线,建立SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法。(2)100 bp、183 bp、278 bpβ-actin内参基因含量NSCLC组均明显高于良性疾病组及健康对照组(P<0.001),三个片段肺良性疾病组均高于健康对照组(P<0.01)。三个片段β-actin内参基因含量在NSCLC外周血中含量不同,随着DNA片段长度的增加,基因含量逐渐减少。术后一天组血浆短片段游离DNA含量较术前明显增高(P<0.05);手术后三周NSCLC患者血浆游离DNA含量较术前明显降低(P<0.001),化疗后游离DNA含量较术后增高(P<0.01)。(3)nsclc组游离dna完整性明显高于肺良性疾病组及健康对照组(p<0.01),术后3w组与术前组比较游离dna完整性降低(p<0.05)。(4)血浆游离dna含量与nsclc患者临床分期、转移情况及肿瘤大小相关;游离dna完整性与nsclc患者的年龄、性别、吸烟状况、临床分期、病理类型、肿瘤细胞分化程度、有无转移及肿瘤大小均无明显相关性。(5)三个片段β-actin含量及dna完整性诊断nsclc的roc曲线下面积分别为0.831,0.814,0.785,0.702。第二部分(1)nsclc组cea-cfdna、krt19-cfdna含量均明显高于良性疾病组及健康对照组(p<0.001),术后cea-cfdna、krt19-cfdna含量较术前明显降低(p<0.05),化疗后cea-cfdna含量较术后组升高(p<0.05)。(2)nsclc组血清cea、cyfra21-1含量均明显高于良性疾病组及健康对照组(p<0.05),良性疾病组cea含量明显高于健康对照组(p<0.01);nsclc及肺良性疾病组hs-crp含量无明显统计学差异,但其均高于健康对照组(p<0.01)。术后组cea及cyfra21-1含量较术前明显降低(p<0.05),二者在化疗组与术后组间比较无明显差异;hs-crp含量在手术前后组及化疗后变化无明显差异。(3)cea-cfdna含量与nsclc患者肿瘤大小有关,krt19-cfdna患者肿瘤临床分期、转移情况肿瘤大小相关,cea含量与肿瘤病理类型相关;cyfra21-1含量与患者肿瘤分化程度、转移情况及肿瘤大小相关;hs-crp含量与肿瘤分化程度、临床分期、转移情况及肿瘤大小相关。(4)cea-cfdna、krt19-cfdna及血清cea、cyfra21-1、hs-crp诊断nsclc的roc曲线下面积分别为0.911,0.803,0.839,0.759,0.622.血清cea、cyfra21-1及游离dna之间明显相关(r=0.324,0.401,p均<0.01)。结论1.血浆游离dna含量及其完整性在nsclc中具有较高的区分度,其在早期诊断及术后随访中具有一定的临床应用价值。2.血清肿瘤标志物及其对应血浆游离dna在nsclc的早期诊断及手术治疗效果的评估中具有较高的应用价值。3.血浆游离dna含量及血清标志物对nsclc患者的分期、分化、肿瘤负荷及转移情况等临床状态的评估具有一定的参考价值。4.外周血游离DNA的检测具有取材方便、操作简单、侵袭性小,易于大规模开展等优点,具有广阔的临床应用前景。