烟草花叶病毒病是在世界范围内广泛分布的一种植物病害,严重危害了烟草的产量与品质,植物细胞中的蛋白质复合物通过与烟草花叶病毒编码的蛋白相互作用在抗病信号传导中发挥着关键作用。IP-L是从烟草c DNA文库中筛选出的与To MV CP互作的寄主蛋白,它参与了To MV的长距离运动,同时在沉默IP-L转录组中发现差异表达基因NbCML30能够与IP-L互作,并且NbCML30在本氏烟与TMV互作过程中起正调控作用。本试验在本氏烟中瞬时过表达NbCML30和IP-L验证它们在病毒侵染过程中的作用,并结合转录组数据探究NbCML30抑制病毒侵染的机制。利用荧光素酶互补成像进一步验证IP-L和NbCML30的互作,并探究IP-L对NbCML30表达的影响。分析沉默NbCML30的本氏烟转录组,筛选差异表达基因后通过VIGS技术和瞬时过表达探究HSP23、MBF1c、TLP1在TMV侵染过程中的作用。在番茄全基因组中检索NbCML30的同源基因,通过VIGS技术研究SlCML30在番茄响应TMV、辣椒疫霉侵染过程中的功能。根据NbCML30全长序列设计引物,构建植物表达载体NbCML30:mcherry、NbCML30:Myc。在本氏烟中瞬时表达NbCML30:mcherry,48-72 h在激光共聚焦显微镜观察发现,融合了NbCML30的mcherry红色荧光定位于核膜及质膜上。通过q RT-PCR发现NbCML30在成熟期本氏烟草叶中的表达量最高,在花中表达量最低,同时本氏烟草叶中NbCML30表达量在开花期最高,幼苗期次之,成熟期最低。在本氏烟中瞬时过表达NbCML30、IP-L后发现,与对照处理相比,过表达NbCML30后抑制了病毒的侵染,过表达IP-L后促进了病毒的侵染。结合转录组数据分析发现,沉默NbCML30后能够诱导RDR1的上调表达以及促进气孔张开,但不影响本氏烟中活性氧的迸发。我们将NbCML30与荧光素酶的C端部分融合构建了表达载体NbCML30:c LUC,IP-L:n LUC由实验室构建保存。通过荧光素酶互补成像试验进一步验证了NbCML30与IP-L在植物体内的互作。利用农杆菌浸润方法在本氏烟中瞬时表达,发现融合了NbCML30的mcherry红色荧光与融合了IP-L的e GFP绿色荧光均在本氏烟质膜及核膜上表达,说明NbCML30与IP-L共定位在质膜及核膜上。采用TRV介导的基因沉默（VIGS）对IP-L和NbCML30进行共沉默,结果显示,接毒后4、6、8天在共沉默植株和对照植株中TMV-GFP的相对表达量没有显著差异。表明共沉默IP-L和NbCML30对病毒在本氏烟中的侵染移动没有影响。使用蛋白酶体抑制剂MG132来阐明NbCML30的降解途径,结果表明,NbCML30的稳定性受到26S泛素蛋白酶体途径的调节,并且IP-L能够稳定NbCML30的表达。借助Sol Genomic Network VIGS Tool工具选取非保守区段,构建TRV介导的沉默载体TRV:HSP23、TRV:MBF1c。根据基因全长序列设计引物,构建表达载体TLP1:e GFP。利用农杆菌浸润法在本氏烟中进行系统沉默或瞬时表达。用TMV-GFP进行摩擦接种,发现沉默HSP23、MBF1c的本氏烟中TMV-GFP表达量均少于对照植株,表明沉默HSP23、MBF1c后不利于TMV在本氏烟中的复制移动;在瞬时过表达TLP1的本氏烟中TMV-GFP表达量要少于对照植株,表明过表达TLP1后抑制了TMV在本氏烟中的侵染。通过酵母双杂交探究HSP23、MBF1c、TLP1与TMV解旋酶蛋白P50、运动蛋白、外壳蛋白之间的互作关系,结果显示HSP23、MBF1c、TLP1均不与TMV编码蛋白互作。同时为了明确HSP23、MBF1c、TLP1与NbCML30、IP-L是否存在互作关系,利用酵母双杂交发现共转化后TLP1与IP-L的酵母菌能够在营养缺陷型培养基上正常生长并在X-α-gal存在下变蓝。在共聚焦显微镜下观察到p CV-n YFP:TLP1-ΔSP与p CV-c YFP:IP-L在叶绿体中出现了融合的黄色荧光,这些结果表明TLP1与IP-L存在互作。亚细胞定位表明TLP1可能定位在细胞质和细胞核中。利用NbCML30的氨基酸序列在番茄全基因组中进行Blastp检索,将番茄中NbCML30同源基因命名为SlCML30。通过q RT-PCR发现SlCML30在番茄的根中表达量最高,之后依次为花、叶和茎,表达量最低的是番茄果实。并且外施Me SA、Me JA和ETH后均能在不同程度上抑制SlCML30的表达。荧光显微镜下观察到融合了SlCML30的e GFP绿色荧光定位在质膜及细胞核上。利用VIGS技术进行番茄中SlCML30的系统沉默,发现沉默SlCML30增强了番茄植株对TMV和辣椒疫霉的抗性,表明SlCML30在植物免疫中起负调控作用。