宫颈癌是众多妇科恶性肿瘤中最常见的,对女性健康构成严重威胁。现有的宫颈癌早期筛查方法主要为宫颈涂片细胞学检测和人乳头瘤病毒检测,这些方法需要特定的隐私环境、取材较繁琐、检测流程需要病理科专业的配套设备等。因此在较多地区由于各种原因患者较难接受该方法而不重视宫颈癌早期筛查,往往在出现临床症状后才就医。此时多属于宫颈癌的中晚期,大大增加了手术治疗的难度,有的甚至已经错过了手术治疗的机会,严重影响患者预后。有研究数据表明经济落后的地区宫颈癌的发病率更高,开发一种廉价、灵敏的宫颈癌筛查方法有现实意义。从正常的宫颈发展成为宫颈癌是一个渐进的过程,多项研究表明对临床血清中特异性生物标志物的超敏检测有助于宫颈癌的早期诊断。宫颈癌病理类型为鳞状细胞癌高达80%,鳞状细胞癌抗原（SCCA）是一种常用于诊断鳞状细胞癌的肿瘤生物标志物。SCCA是一种糖蛋白,在正常鳞状细胞的胞浆内水平较高,但血清水平正常;而在发生鳞状细胞癌时,其血清水平显著升高。检测SCCA的血清水平有利于宫颈癌的诊断。骨桥蛋白（OPN）属于一种分泌型糖蛋白,有促进肿瘤细胞修复和侵袭的能力,其在体内的表达水平变化与肿瘤的发生发展密切相关。根据以上两种肿瘤标志物的生物学特征,他们的血清水平在肿瘤的病程中会发生改变,且同时检测两种宫颈癌相关血清生物标志物可以提升检测结果的准确性。表面增强拉曼散射（SERS）光谱具有独特的光谱指纹,特异性强可以实现分子级别物质的定性定量分析,且具有优异的灵敏度在生物标志物的检测中也被广泛应用。不同的拉曼信号分子的光谱拥有易于区分的特征峰,能够满足同时分析多种目标物的需求,且可以提高检测效率,缩减检测费用。本文建立了一种基于SERS的免疫分析法,用于同时检测宫颈癌血清中SCCA和OPN。设计的基于SERS的超灵敏免疫分析平台,包括SERS标记物和捕获基底。两种Au-Ag纳米梭（Au-Ag NSs）SERS标记物的制备选用了拉曼峰不同的4-巯基苯甲酸（4-MBA）和5,5‘-二硫噻吩（2-硝基苯甲酸）（DTNB）,它们不仅可以与Au-Ag NSs形成稳定Au-S键,还可以与SCCA和OPN的抗体（标记）形成酰胺键。同理,利用二巯基琥珀酸（DMSA）的化学特性为基于疏水纸的金纳米花基底修饰上SCCA和OPN的抗体（涂层）得到了具有免疫活性的捕获基底。在免疫基底捕获SCCA和OPN后,加入两种SERS标记物,形成“基底-抗原-标记”的三明治夹心免疫复合物,监测SERS标记物的信号强度来定量分析SCCA和OPN。时域有限差分（FDTD）模拟表明Au NFs在激光照射后周围用具较强的电磁场,这有利于SERS信号的增强,从而提高检测灵敏度。SERS映射证实了在经过十六烯基琥珀酸酐（HDSA）疏水处理后的滤纸可以防止分析物被滤纸快速吸附,增加滞留时间,使其更均匀地分布在滤纸基底上,且为充分反应保证了时间。一系列实验结果表明所提出的免疫分析平台具有良好的选择性和重现性。该方法对人血清中SCCA和OPN的检出限分别为8.628 pg/m L和4.388 pg/m L。最后,为了验证其临床应用的可行性,对健康受试者、宫颈上皮内瘤变Ⅰ（CINⅠ）、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌患者的血清样本进行分析,并通过酶联免疫吸附试验验证结果的可靠性。所构建的基于SERS的免疫分析平台可作为未来癌症早期筛查的临床工具。