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目的: 分别构建刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）表面抗原1(surface antigen1，SAG1)及棒状体蛋白18（rhoptry protein18，ROP18）的真核表达质粒，并在真核细胞293T中表达目的蛋白。观察弓形虫SAG1、ROP18单基因疫苗及联合疫苗诱导BALB/c小鼠的保护性免疫作用。 方法: 设计弓形虫SAG1、ROP18的特异引物，用RCR技术从弓形虫RH株cDNA中扩增编码SAG1、ROP18基因片段，经克隆至pTG19-T载体后，亚克隆至真核表达载体p3×FLAG-Myc-CMVTM-24，构建真核表达重组质粒p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18。 将构建好的真核表达重组质粒转染人肾上皮细胞系293T细胞，RT-PCR和蛋白质印迹技术(Western blotting)分析转染细胞的目的蛋白表达情况。 大量制备重组真核表达质粒p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1，p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18及对照质粒p3×FLAG-Myc-CMVTM-24，用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释至1μg/μL。将102只BALB/c小鼠随机分成六组，第1组为PBS对照组（PBS组），每次注射100μL;第2组为空载体p3×FLAG-Myc-CMVTM-24对照组（空载体组），每次注射100μL;第3组为p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1（SAG1组），每次注射100μL;第4组为p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18（ROP18组），每次注射100μL;第5组为p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18混合组（全量混合组），每次分别注射100μL;第6组为p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18混合组（半量混合组），每次分别注射50μL。每两周免疫一次，共免疫3次。末次免疫后四周，各组随机取7只小鼠，无菌取脾，流式细胞仪检测小鼠脾脏CD4+T、CD8+T细胞群，Real-time PCR检测各组小鼠脾脏细胞因子IL-4、IL-12和IFN-γ。每组剩余10只小鼠经腹腔接种1×103个弓形虫速殖子，观察小鼠的生存时间。 结果: PCR扩增弓形虫SAG1和ROP18基因片段大小分别为1011bp和1665bp，与预期大小相符。重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定结果均正确。 通过RT-PCR和蛋白质印迹技术鉴定出重组p3×FLAG-Myc-CMV-24-SAG1和p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18在293T细胞中表达。 小鼠脾脏T细胞亚群CD4+T、CD8+T动态分析，CD4+T细胞在各组的增殖无明显差异(P＞0.05);SAG1组、ROP18组、全量混合组和半量混合组的CD8+T细胞较PBS组和空载体组增殖明显(P＜0.01);半量混合组较全量混合组、SAG1组、ROP18组CD8+T细胞增殖明显(P＜0.05)。CD4+T/CD8+T比值，半量混合组、全量混合组、SAG1组和ROP18组较PBS组和空载体组差异显著(P＜0.05）。 Real-time PCR检测小鼠脾细胞因子，各组小鼠IL-4的含量差异无统计学意义(P＞0.05);全量混合组和半量混合组小鼠脾细胞IL-12的含量比PBS组和空载体组高，且差异有统计学意义(P＜0.05);全量混合组和半量混合组小鼠脾细胞IFN-γ的含量比PBS组和空载体组高，且差异有统计学意义(P＜0.05);半量混合组小鼠脾细胞IFN-γ的含量比ROP18组高，且差异有统计学意义(P＜0.05)。 弓形虫速殖子接种感染小鼠，SAG1组、ROP18、全量混合组和半量混合组较PBS组和空载体组的生存时间均有延长(P＜0.05)，半量混合组较全量混合组的生存时间也显著延长(P＜0.01)，但全量混合组与SAG1组和ROP18之间小鼠生存时间未见明显差异(P＞0.05)。 结论: 弓形虫SAG1、ROP18 DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫应答及部分抗虫免疫保护作用，此两种DNA疫苗联合免疫较单个免疫能使小鼠产生更好的免疫保护力，且合适的DNA接种量能诱导小鼠产生更强的免疫保护作用。