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目的:鉴定来源于梅毒螺旋体(Treponema pallidum subsp.Pallidum,Tp)刺激后的巨噬细胞分泌外泌体中miRNA表达谱。探讨目标miR-146a-5p对血管内皮细胞通透性及单个核细胞跨内皮迁移的作用及其相关机制。方法:将Tp接种于雄兔睾丸,建立感染模型,获取足量、高纯度梅毒螺旋体。ExoQuick-TCTM试剂盒提取Tp刺激巨噬细胞分泌的外泌体,予以透射电镜、NTA及Western blot鉴定。提取Tp刺激组和对照细胞外泌体中的miRNA进行芯片鉴定,筛选差异性miRNA。选择差异性表达较明显的miR-146a-5p作为研究对象,RT-qPCR进一步验证miR-146a-5p的表达情况。提取20个早期梅毒患者和20名健康对照血浆外泌体,RT-qPCR验证miR-146a-5p的表达情况。外泌体与HUVEC共培养后通过激光共聚焦显微镜和RT-qPCR的方法验证miR-146a-5p在细胞间传递。应用Transwell构建HUVEC单层模型,检测外泌体中miR-146a-5p对HUVEC单层的通透性及单个核细胞跨内皮迁移的影响。应用双荧光素酶报告基因检测法对miR-146a-5p与JAM-C基因3’-UTR的相互作用进行验证,流式细胞技术检测过表达和抑制miR-146a-5p后HUVEC细胞JAM-C蛋白的表达。siRNA敲低HUVEC中JAM-C检测对通透性及单个核细胞跨内皮迁移变化情况。结果:1.透射电镜下可见外泌体成杯托状的微小囊泡,直径40～100nm。Western blot检测提示外泌体丰富表达膜蛋白CD9、CD63、CD81。NTA检测发现实验组和对照组外泌体浓度无明显差异(t=2.78,P>0.05)。2.miRNA芯片鉴定出65个差异性miRNA,其中上调35个,下调30个。miR-146a-5p在12小时、24小时和48小时分别上调8.07倍、7.35倍和17.70倍,RT-qPCR验证结果显示实验组miR-146a-5p表达较对照组明显升高(12h,t=4.44,P<0.01;24h,t=2.79,P<0.05;48h,t=3.10,P<0.05)。早期梅毒患者血浆外泌体中 miRNA-146a-5p较健康对照组明显升高(t=2.82,P<0.01)。3.将Cy3标记miR-146a-5pmimic转染至巨噬细胞,通过免疫荧光显微镜可观察到Cy3标记miR-146a-5p伴随外泌体可传递到HUVEC,并且可导致HUVEC中miR-146a-5表达显著升高(t=2.98,P<0.05),而提前用10μM GW4869处理巨噬细胞24小时后RT-qPCR结果显示两组间miR-146a-5表达无差异(t=1.11,P>0.05)。4.富含miR-146a-5p外泌体与HUVEC共培养可显著降低HUVEC单层通透性和单个核细胞跨内皮迁移数量。5.双荧光素酶报告实验结果显示miR-146a-5p mimic对含野生型JAM-C全长的荧光素酶报告基因载体荧光素酶活性的直接抑制作用,miR-146a-5p mimic可抑制HUVEC 细胞 JAM-C 表达而 miR-146a-5p inhibitor 可使 HUVEC 细胞 JAM-C 表达显著增高。siRNA敲低JAM-C可使HUVEC单层通透性和单个核细胞跨内皮迁移降低。结论:1.通过梅毒螺旋体感染动物模型获得的高纯度有活性的Tp刺激巨噬细胞获得的外泌体可用于下游实验。2.梅毒螺旋体刺激巨噬细胞可使其分泌的外泌体中miR-146a-5p表达增高。3.巨噬细胞分泌的外泌体中miR-146a-5p可以传递给血管内皮细胞。4.外泌体中miR-146a-5p可通过抑制血管内皮细胞的靶基因JAM-C使血管内皮细胞通透性及单个核细胞跨内皮迁移降低。