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目的:皮肤黑素瘤是一种恶性皮肤肿瘤,侵袭性较强且预后较差。由于对于其发病机制目前仍然不是非常清楚,所以给治疗带来了极大的困难。由于其容易发生转移,我们所熟悉的手术外科治疗效果并不如人意,但是其对放化疗的敏感性也很差。最近几年对于肿瘤治疗研究,相关领域的专家掀起了自噬介导的抗癌疗法研究的新热潮。高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种重要的细胞自噬的活化调节蛋白,同时在肿瘤血管的生成中也是发挥着重要的作用。在前期的研究中发现,HMGB1在一些包括黑素瘤在内的肿瘤细胞中的表达升高,且在一些肿瘤细胞的耐药性中发挥作用,但其在其中的具体功能及其涉及的信号通路仍然不是非常明确。因此,本研究旨在探讨:1.高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对小鼠黑素瘤B16细胞自噬作用的影响。2.研究MEK/ERK信号通路在HMGB1调节小鼠黑素瘤B16细胞自噬中的作用。方法:选用体外培养的小鼠黑素瘤B16细胞为研究对象,为了证实HMGB1是否直接介导自噬,在细胞培养的基础上,通过预先的药物处理及细胞转染等方式处理细胞,再通过CCK-8试剂检测细胞增殖活力,Western blot方法检测分子指标:自噬有关的蛋白LC3-II,LC3-I及自噬降解蛋白p62及MEK/ERK信号通路主要信号分子MEK1/2、ERK1/2及p ERK1/2的表达情况。从而进一步探明HMGB1对细胞自噬的影响及其相关机制。1.首先通过一组实验将细胞分成两组,实验组细胞用不同浓度的外源性重组HMGB1处理细胞24小时,对照组不用HMGB1处理。CCK-8试剂盒检测不同处理组细胞增殖活力;2.通过western blotting检测自噬标志性蛋白LC3-II、LC3-I、自噬降解蛋白p62表达变化。3.为了进一步验证HMGB1在小鼠黑素瘤B16细胞自噬中的作用,实验组细胞用针对HMGB1的sh RNA干扰,对照组用阴性对照sh RNA,再通过western blotting检测HMGB1及自噬标志性蛋白LC3II、LC3I,及自噬降解蛋白p62表达变化。4.实验中选取两组细胞用不同方式处理细胞。实验组用HMGB1处理细胞24h,对照组未处理。通过western blot检测HMGB1对自噬标志性蛋白及MEK/ERK信号通路主要信号分子表达的影响。5.实验将细胞分成两组:实验组HMGB1+3-MA组及对照组HMGB1组,用western blot分别检测MEK/ERK信号通路及自噬相关主要信号分子表达的影响。6.通过细胞转染技术用MEK1/2 sh RNA敲除小鼠黑素瘤细胞B16细胞MEK1/2表达,采用western blotting检测自噬标志性蛋白LC3II及LC3I及信号通路MEK1/2及p ERK1/2的表达情况。结果1.HMGB1促进小鼠黑素瘤B16细胞增殖活力,并随着HMGB1浓度水平升高而升高。2.单独经HMGB1处理的细胞组自噬标志性蛋白LC3II及LC3I的表达水平较空白对照组明显增加,而自噬降解蛋白p62表达下降。3.HMGB1si RNA组HMGB1及自噬标志性蛋白LC3II及LC3I的表达水平较空白对照组明显降低,而自噬降解蛋白p62表达升高。4.经HMGB1处理的细胞组LC3II及LC3I及信号通路MEK1/2及p ERK1/2的表达较对照组明显升高。5.加入自噬抑制剂3-MA组LC3II及LC3I及信号通路MEK1/2及p ERK1/2的表达较对照组明显下降。6.MEK1/2 sh RNA组LC3II、LC3I及信号通路MEK1/2及p ERK1/2的表达较对照组明显下降。结论:HMGB1通过MEK/ERK信号通路促进小鼠黑素瘤细胞细胞自噬作用。