研究目的:本研究旨在通过运用网络药理学和分子对接技术,同时结合体外实验对金荞麦有效活性成分治疗宫颈癌关键靶点及可能的分子机制进行初步验证,阐释其作用机理。研究方法:1.采用网络药理学技术分析金荞麦治疗宫颈癌的潜在生物学通路及关键蛋白;通过分子对接技术筛选金荞麦治疗宫颈癌的潜在活性成分并分析活性成分与关键靶标在体外的结合能力;运用蛋白表达与纯化技术体外获取实验所需的蛋白样品;使用表面等离子共振实验验证活性成分与关键蛋白的结合能力及结合模式。2.采用细胞增殖和毒性实验（Cell counting kit-8,CCK8）观察药效活性成分对肿瘤细胞生存率的影响;实时荧光定量PCR（Real time fluorescence polymerase chain reaction,RT-PCR）测定药效活性成分对宫颈癌细胞中基因表达的影响;蛋白免疫印迹（Western Blot,WB）检测药效活性成分对宫颈癌细胞中蛋白表达的影响。研究结果:1.网络药理学及分子对接结果:采用网络药理学技术分别对金荞麦靶蛋白及宫颈癌靶基因进行分析,结果表明,肿瘤相关生物学通路在两者中发挥重要作用;进一步对两者共同调控的生物学通路进行比较分析,结果显示,细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶（ERK/MAPK）通路在金荞麦和宫颈癌共同参与的生物学通路最为重要;对ERK/MAPK生物学通路进行可视化分析发现,网络中心区为高连接分子蛋白丝裂原活化蛋白激酶1（Mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1）、转录信号转导子与激活子3（Signal transducers and activators of transcription 3,STAT3）、雌激素受体1（Estrogen receptor 1,ESR1）、C-RAF原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶（RAF1）、SRC蛋白激酶（SRC）等为两者共同作用的关键靶点,且MAPK1与其他蛋白的连接度最高;将筛选出的金荞麦活性成分与关键靶点进行分子对接发现,儿茶素没食子酸酯与MAPK1结合能最低亲和力最强,其可能是金荞麦治疗宫颈癌的潜在活性成分;对儿茶素没食子酸酯与宫颈癌交集靶点进行网络药理学分析发现,ERK/MAPK生物学通路是与两者关联强度最高的生物学通路;通过表面等离子体共振实验验证儿茶素没食子酸酯与MAPK1的结合能力,发现两者之间存在特异性结合,且结合能力较强。2.体外实验结果:研究了不同浓度的儿茶素没食子酸酯对宫颈癌Hela细胞的影响,结果显示儿茶素没食子酸酯对宫颈癌Hela细胞生存率有显著的抑制作用,且随着药物浓度的增加,细胞生存率呈递减趋势,IC50为100μM;对于儿茶素没食子酸酯干预的Hela细胞,与Control组相比,50μM和100μM儿茶素没食子酸酯干预组肿瘤坏死因子α（Tumour necrosis factorα,TNF-α）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2）m RNA表达下调,而促凋亡基因Bcl-2相关X蛋白（BCL2-associated X,Bax）m RNA表达上调;同时,50μM和100μM儿茶素没食子酸酯干预组可以抑制蛋白MAPK1、IκB激酶α（Inhibitor of NF-κB kinaseα,IKKα）、NF-κB抑制蛋白α（Inhibitor of NF-κbα,IκBα）、核转录因子-κB（Nuclear factorkappa B,NF-κB）磷酸化水平,从而阻滞ERK/MAPK通路被激活。研究结论:金荞麦中的活性成分儿茶素没食子酸酯能够显著抑制宫颈癌细胞生长,其可能通过靶向调控MAPK1进而影响了ERK/MAPK通路,这可能是金荞麦治疗宫颈癌潜在机制之一。