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背景与目的:当前,多种良恶性肝脏肿瘤疾病的最有效的治疗方法是肝部分切除术(Partial hepatectomy,PH),但是切除过小则会引起肿瘤复发或者不能完全根治疾病,切除过大有可能出现肝功能衰竭。这样就造成了一个肝脏切除过多会导致术后肝功能衰竭和治疗效果之间的悖论,也严重限制了肝脏外科手术的应用。通过其他有效的途径解决这个问题也存在着各种不同的瓶颈和风险,例如肝移植,虽然可以有效代偿肝脏功能,但是也存在着供体不足、免疫排斥和巨额费用的问题;另外,人工肝的研制还处于基础研究阶段,能够有效替代肝脏复杂生化功能的人工肝脏仍然没有成熟的商业化产品。这样,学术界将眼光转向了肝再生领域。肝脏具有很强的再生潜力,所以如何有效刺激自身肝再生则是解决这些问题的理想途径,可弥补生物人工肝和肝移植技术的不足,有效解决肝功能衰竭。国内外学者也积极开展了针对可以加快肝细胞增殖的速率的分子机制的研究,并成为近年来肝胆科的研究重点。本研究就是在前期的研究基础上,重点探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响。材料与方法:1、应用RNA干扰(RNAinterfering,RNAi)技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,并提取蛋白利用Western Blotting实验验证干扰效率的结果;2、实验分组:对照组(Ctrl组);si RNA干扰Tmub1表达组(si RNA组);siRNA干扰Tmub1表达并用0.5μmol/L MK2206处理细胞24h,对Akt磷酸化进行抑制组(siRNA+MK2206组);3、对数生长期对细胞进行不同的处理后,采用平板集落形成实验计算克隆形成率和CCK-8检测细胞增殖能力;4、对数生长期对细胞进行不同的处理后,采Trizol法提取细胞总RNA,逆转录得到cDNA,以GAPDH作为内参,用RT-qPCR检测Tmub1、Akt、cyclin D1以及c-myc等基因的mRNA表达水平;5、对数生长期对细胞进行不同的处理后,以GAPDH作为内参,提取蛋白利用Western Blotting实验分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、cyclin D1以及c-myc等蛋白表达水平;6、取各组对数生长期细胞并进行相应处理后,流式细胞术检测细胞周期。结果:1、采用RNAi技术下调Tmub1的表达,Western Blotting实验显示可以明显的抑制Tmub1基因的表达;2、与Ctrl组和si RNA+MK2206组相比,si RNA组细胞的集落形成数明显增多(p<0.05),Akt磷酸化抑制剂MK2206可以明显抑制细胞增殖能力(p<0.05);3、CCK-8测细胞的增殖能力也显示,与Ctrl组和siRNA+MK2206组相比,si RNA组细胞增殖能力在培养的第2d、3d均增高(p<0.05);4、与Ctrl组相比,Tmub1基因沉默后,cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(均p<0.05),通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的m RNA表达水平(p<0.05);5、与Ctrl组相比,Tmub1基因沉默后,p-Akt磷酸化水平以及cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(均p<0.05),通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的蛋白表达水平(p<0.05);6、与Ctrl组相比,Tmub1基因沉默后,处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(p<0.05),通过MK2206抑制Akt磷酸化后,并且处于S+G2/M期的细胞比例下降(p<0.05)。结论:1、Tmub1沉默可以增加BRL-3A细胞的cyclin D1、c-myc基因的m RNA表达水平;2、Tmub1沉默可以增加BRL-3A细胞的Akt蛋白的磷酸化及cyclin D1、c-myc蛋白的表达水平;3、Tmub1沉默可以促进BRL-3A细胞G0/G1期细胞比例减少,而S期和G2/M期比例增加;4、Tmub1沉默可以促进BRL-3A细胞的增殖。