目前,包括细胞培养在内的细胞工程技术已成为畜禽遗传资源活体保护强有力的辅助手段。皖东牛是新发现的国家级地方黄牛资源,适应性强、肉用性能佳,但现存群体数量较少,亟待保护。本试验采用组织块贴壁法对两头皖东牛种公牛皮肤成纤维细胞进行建系与生长特性鉴定,尝试了从冷冻精液中分离体细胞,旨在为建立皖东牛细胞库,丰富皖东牛种质资源保护手段奠定基础。取得主要结果如下:(1)培养细胞形态为长梭形成纤维状,生长曲线呈“S”型,符合成纤维细胞体外培养规律;(2)皖东牛34115053(后文简称为A)冻存前和复苏后第二代(Passge 2,简称P2)细胞平均活率分别为99.75%、91.82%,皖东牛34114125(后文简称为B)(P2)分别为97.88%、92.90%,表明该细胞可适应常规冻存;(3)对A(P5)、B(P11)成纤维细胞各70个分裂相的染色体分析,2N=60比重为91.43%(64/70)、82.86%(58/70),可稳定遗传;(4)添加15%的Gibco胎牛血清时,细胞增殖速率优于15%四季青胎牛血清组,而与10%的Gibco血清组相近,表明10%的Gibco血清浓度更适用;(5)A(P2、P5、P8)和B(P3、P6、P9)不同代次间,细胞生长状态和倍增时间无明显差异,为体细胞克隆选择最佳供体细胞代次奠定基础。成功建立了两头皖东牛种公牛成纤维细胞系,可作为皖东牛遗传资源保护的材料,为建立皖东牛细胞库奠定了坚实的基础。