【摘 要】
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Activin基因编码的蛋白及其作用受体属于转化生长因子β家族(TGFβ)中的一员,Activin基因βA亚基成熟肽片段是该基因中最为保守的序列,其蛋白质产物在体内承担着非常重要的生物学功能。其中,Activin基因促进FSH(follicle-stimulating hormone,卵泡激素)释放的作用,对于生物体的生殖繁育尤为关键。大熊猫目前所面临的濒危境地,重要原因之一是自身生殖繁育的障碍。
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Activin基因编码的蛋白及其作用受体属于转化生长因子β家族(TGFβ)中的一员,Activin基因βA亚基成熟肽片段是该基因中最为保守的序列,其蛋白质产物在体内承担着非常重要的生物学功能。其中,Activin基因促进FSH(follicle-stimulating hormone,卵泡激素)释放的作用,对于生物体的生殖繁育尤为关键。大熊猫目前所面临的濒危境地,重要原因之一是自身生殖繁育的障碍。因此克隆和分析Activin基因βA亚基成熟肽序列对于大熊猫生殖功能的研究具有不可忽视的意义。此外由于Activin基因βA亚基成熟肽序列高度保守,它还能用于核基因对大熊猫及其近种系统发育与分类的研究当中。 借鉴互联网中已经克隆到的Activin基因βA亚基成熟肽序列,设计并合成一对兼并引物,利用PCR技术从大熊猫、小熊猫、马来熊的基因组DNA中直接扩增目的基因片段,并分别克隆到大肠杆菌载体pBlueScript+当中,然后对培养产物进行序列测定。 DNA的序列分析表明:三种物种的Activin基因日A亚基成熟肤序列长度一致,为359bp,无内含子。基因片段编码一个含有119个氨基酸残基的肤段。大熊猫、小熊猫、马来熊在该成熟肤核昔酸和氨基酸序列上表现出高度的同源性,其中核普酸同源性为93.9%,氨基酸同源性更高达99%以上。此外三种动物的核酸限制性酶切图谱也高度相似。与GENEBANK中收录的其它物种Activin基因日A亚基成熟肤序列相比较后发现此片段在处于不同进化程度的物种之间仍具有高度保守性。 运用进行系统发育与进化树研究的PHILIP软件包和克隆测序到的Activin基因日人亚基成熟肤序列,对大熊猫、小熊猫进化与分类地位进行了探讨。采用不同的统计学分析方法,包括最大简约法、遗传距离法、最大似然法等,所得到的三个物种系统发育进化树的拓扑结构完全一致:相比较而言,大熊猫与马来熊有着较近的亲缘关系,而小熊猫则与上述两个物种的亲缘关系较为疏远。结果支持将大熊猫与马来熊一起归为熊科,而小熊猫单列成科的流行观点。这是首次以生殖相关的核基因为研究对象,为大熊猫及其近种进行系统分类研究所提供的又一分子生物学证据。
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