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一、人胰腺癌组织增殖诱导配体蛋白表达检测目的：本研究拟检测胰腺癌组织APRIL蛋白的表达情况，并同正常人胰腺组织比较，分析其表达率与胰腺癌生物学行为的关系，旨在为胰腺癌的早期诊断和预后判断寻找新的肿瘤标志物。方法：利用免疫组化En Vision两步法检测20例人胰腺癌组织APRIL蛋白的表达情况，并与正常人胰腺组织(10例)APRIL蛋白的表达情况进行对比。结果：胰腺癌组织中APRIL阳性率为90.0％(18／20)。不同组织学类型APRIL蛋白表达相类似。10例正常人胰腺组织APRIL染色反应全部阴性(0／10)；胰腺癌组织APRIL蛋白表达与胰腺癌的分化程度、淋巴结转移、远处转移、病灶大小无关。结论：APRIL在胰腺癌的发生、发展过程中起一定作用，可能为胰腺癌的早期诊断和治疗提供新的分子靶点。二、APRIL高表达胰腺癌细胞株筛选目的：筛选出增殖诱导配体(APRIL)mRNA高水平表达的人胰腺癌细胞株，为进一步应用RNA干扰技术治疗胰腺癌研究，探讨APRIL基因在胰腺癌以及其他肿瘤发生、发展以及转移过程中的作用机制奠定基础。方法：选择3株人胰腺癌细胞(PANC-1、CFPAC-1、BXPC-3)培养提取mRNA后，逆转录成cDNA作PCR模板。在APRIL基因高保守区设计了特异性的引物，PCR扩增目的片段，以磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参，通过计算机图像扫描系统检测获得各细胞株APRIL表达量的相对值，根据该值确定3株人肿瘤细胞APRIL表达的高低。结果：根据得到的3株细胞APRIL的相对值(PANC-1：0.45；CFPAC-1：1；BXPC-3：0.57)，3株细胞中APRIL表达量高低顺序是：CFPAC-1＞BXPC-3＞PANC-1。结论：通过该法检测到在不同肿瘤细胞株中APRIL的表达水平差异，提示APRIL基因在肿瘤发生、发展过程中起一定作用。三、靶向APRIL基因的双链RNA表达质粒构建与小干扰RNA制备目的：为了特异性地沉默APRIL基因高表达人胰腺癌细胞株CFPAC-1中该基因的表达，制备靶向APRIL基因的小干扰RNA(anti-APRIL-siRNA)。方法：构建靶向APRIL的dsRNA表达质粒pET-22b-APRIL，在大肠杆菌中发酵表达dsRNA，利用CF-11树脂亲和层析纯化得到大肠杆菌发酵表达的dsRNA；用大肠杆菌Ⅲ型RNA水解酶(RNaseⅢ)水解dsRNA；再用DEAE树脂离子交换层析使RnaseⅢ与核苷酸分离，分子筛层析分离纯化出21 bp的anti-APRIL-siRNA。结果：靶向APRIL的dsRNA表达质粒在大肠杆菌中由IPTG诱导表达出的dsRNA经CF-11树脂纯化得到；dsRNA用RNaseⅢ水解后过DEAE树脂离子交换层析和分子筛层析分离纯化，15％PAGE、12％SDS-PAGE电泳证实RNaseⅢ与核苷酸分离，并纯化得到21 bp大小的anti-APRIL-siRNA。结论：利用体外转录法我们制备出了靶向CFPAC-1细胞株的anti-APRIL-siRNA，为下一步沉默CFPAC-1细胞APRIL基因表达的实验研究奠定基础。