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卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,其恶性程度和死亡率均较高,进展迅速,预后很差。卵巢癌早期缺乏典型症状,难以被发现,确诊时大多处于中晚期,治疗效果差,复发率高。进一步提高卵巢癌的早期检出率和辅助诊断手段是改善卵巢癌预后的关键。一种良好的筛查或辅助诊断方法应具有取材容易、检测方法简单、结果快速、价格低廉的特点。目前,病理学检查是卵巢癌的确诊依据,也是后续分期、预后评估的重要依据,磁共振成像,基因芯片、蛋白质组学等是相对高效的辅助检查手段。但有创或费用昂贵等限制使其难以作为筛查手段用于高危人群的筛查或常规用于卵巢癌的辅助诊断。临床已经采用的血清糖类抗原125（CA125）、阴道超声等筛查方法在高危人群中有一定的卵巢癌检出率,检测方法也相对简单,但筛查效果不甚理想。肠道微生物群落平衡在维持人体健康中发挥着至关重要的作用。肠道微生物群落失调通过调节炎症免疫反应、影响宿主细胞基因组稳定性、破坏肠道黏膜屏障、与宿主代谢物相互作用产生内毒素等参与机体癌变过程。肠道微生物群落失调可能导致具有雌激素代谢基因的微生物增加,进而将结合性雌激素解离成游离雌激素后被机体重新吸收,最终增加机体雌激素水平,而增加的雌激素水平能够调节卵巢上皮细胞的基因转录活性,促进其有丝分裂作用,有利于卵巢上皮细胞癌变发生,同时雌激素导致的细胞黏附和迁移能力增强也有助于卵巢癌的浸润和转移。另外,肠道微生物群落失调还可能通过激活黏膜细胞先天免疫反应和诱导基因突变等参与卵巢癌的发生、发展病理过程。肠道炎症通过激活免疫细胞、引起过氧化损伤、促进炎性细胞因子分泌、诱发基因突变或异常甲基化、激发细胞自噬功能等诱导组织发生癌变。恶性肿瘤的炎症起源假说认为,结直肠癌、胃癌、肝癌等的发生、发展过程中均与肠道炎症反应相关,且可能是关键因素。肠道炎症与肠道微生物菌群失调互为因果,通过持续感染和炎症反应导致肠道通透性增高,肠内致病菌和内毒素等有害物质透过肠上皮屏障进入机体内循环,进而诱发癌变。也有部分研究认为,宫颈癌、子宫内膜癌患者早期或发病前就已经出现肠道炎症。由于宫颈、子宫等与肠道解剖位置较近,所以炎性细胞因子或内毒素可能经过被肠道炎症破坏的肠道上皮屏障释放进入宫颈、子宫周围,促进癌变的发生,这可能是肠道炎症与妇科肿瘤的潜在联系。但肠道炎症与卵巢癌相关研究尚鲜有报道。为了探寻卵巢癌与肠道炎症的相关性以及粪便标志物在卵巢癌诊治中的应用价值。本研究从以下几个方面进行了探讨:通过用胃肠道症状评估量表（GSRS）、肠易激综合征症状严重程度量表（IBS-SSS）和便秘的罗马Ⅲ诊断标准评估上皮性卵巢癌（EOC）患者（EOC组）和正常对照（NC）组健康对照者的胃肠道功能;通过苏木精-伊红（HE）染色观察两组肠道炎症发生情况;通过免疫组织化学染色及免疫荧光染色技术评估两组肠道闭合蛋白（OCLN）和闭锁连接蛋白-1（ZO-1）的表达和定位;通过酶联免疫吸附试验（ELISA）定量分析两组肠道炎症相关粪便标志物粪钙卫蛋白（FCP）和粪乳铁蛋白（FLF）,肠道通透性相关粪便标志物粪α1-抗胰蛋白酶（FATT）和粪连蛋白（FZ）的表达水平。材料与方法1.EOC患者临床病理资料收集收集郑州大学第二附属医院2018年11月至2020年5月收治的经临床病理学确诊且符合入组条件的EOC组患者及健康对照者（NC组）基本资料并进行分析,包括EOC组患者年龄、病理类型、分化程度、淋巴结转移、美国妇产科联合会（FIGO）分期、血清CA125水平以及NC组健康对照者的年龄等。2.EOC患者胃肠道功能评估采用GSRS量表、IBS-SSS量表和便秘的罗马Ⅲ诊断标准比较评估EOC组和NC组研究对象的胃肠道功能,记录胃肠道症状。分析EOC患者胃肠道症状发生与其FIGO分期的关系。3.EOC患者肠道炎症相关指标检测收集结肠黏膜活检组织,采用HE染色比较观察EOC组和NC组结肠黏膜标本的上皮形态及结肠黏膜中炎症细胞的数量;收集新鲜粪便标本,采用ELISA检测并比较两组粪便中炎症相关标志物FCP、FLF的水平,并分析其与EOC患者FIGO分期的关系。4.EOC患者肠道通透性相关指标检测收集结肠黏膜活检组织,采用免疫组织化学染色和免疫荧光染色技术比较观察EOC组和NC组结肠黏膜标本的紧密连接蛋白OCLN、ZO-1表达及分布情况;收集新鲜粪便标本,采用ELISA检测并比较两组粪便中肠道通透性相关标志物FAAT、FZ的水平,并分析其与EOC患者FIGO分期的关系。5.统计学分析采用 GraphPad Prism 8.3.0 和 SPSS 23.0 处理数据;年龄、CA125 水平、GSRS评分、IBS-SSS评分、FCP水平、FLF水平、OCLN相对表达量、ZO-1相对表达量、FAAT水平、FZ水平等计量资料用x±s表示,用Mann-Whitney U检验比较分析两组间的差异,并用Spearman秩相关检验分析上述指标之间及其与EOC患者FIGO分期之间的相关性;便秘的罗马Ⅲ诊断标准符合率等计数资料用百分数表示,用χ2检验比较分析两组差异;绘制ROC曲线评估GSRS评分和FCP、FLF、FAAT、FZ水平对EOC的诊断价值;检验水准α=0.05。结果1.EOC患者临床资料分析结果根据纳入与排除标准,最终纳入研究的EOC患者35例（EOC组）、健康对照者 20 例（NC 组）。EOC 组年龄（57.51±15.19）岁,NC 组（56.60±10.96）岁,差异无统计学意义（U=330.0000,Z=0.3502,P=0.7262）。35 例 EOC 患者中,浆液性囊腺癌19例、透明细胞癌7例、黏液性囊腺癌5例、子宫内膜样腺癌4例,低分化21例、中分化8例、高分化6例,有淋巴结转移13例、无淋巴结转移22例,FIGO分期Ⅰ期9例、Ⅱ期11例、Ⅲ期11例、Ⅳ期4例,其中Ⅰ期、Ⅱ期共20例为早期,Ⅲ期、Ⅳ期共15例为晚期。35例EOC患者血清 CA125 水平为（411.39±377.49）U/mL,其中晚期患者为（698.80±416.11）U/mL,显著高于早期患者的（195.84±115.26）U/mL,差异有统计学意义（U=30.0000,Z=4.0003,P=0.0001）。2.EOC患者胃肠道功能评估结果EOC 组 GSRS 评分和 IBS-SSS 评分分别为（20.69±7.65）、（212.57±68.96）分,均明显高于 NC 组的（13.25±4.84）、（147.00±29.22）分（U=149.0000,Z=3.5231,P=0.0004;U=159.5000,Z=3.3533,P=0.0008）。EOC 组便秘发生率54.29%,明显高于 NC 组的 25.00%（χ2=4.4381,P=0.0351）。晚期 EOC 患者GSRS 评分、IBS-SSS 评分分别为（24.47±8.58）、（252.00±64.50）分,均明显高于早期 EOC 患者的（17.85±5.55）、（183.00±57.41）分（U=79.0000,Z=2.3713,P=0.0177;U=65.0000,Z=2.8463,P=0.0044）。EOC 患者 GSRS 评分和 IBS-SSS 评分与 FIGO 分期均呈正相关（r=0.4436,P=0.0076;r=0.5816,P=0.0002）。EOC患者GSRS、IBS-SSS评分与血清CA125 水平均呈正相关关系r=0.4346,P=0.0091;r=0.4976,P=0.0024)。GSRS 评分用于 EOC 诊断的 ROC曲线下面积为0.79,取截断值为15.50分时,敏感性为70.00%,特异性为71.43%。3.EOC患者肠道炎症相关指标检测结果结肠黏膜活检组织HE染色结果:NC组结肠黏膜组织未见明显病理学异常;EOC组结肠黏膜组织可见肠上皮受损,且黏膜固有层内伴有大量炎症细胞浸润,以单个核为主,表现为非特异炎症。肠道炎症相关粪便标志物检测结果:EOC组患者粪便中 FCP、FLF 水平分别为（277.84±130.05）、（195.62±83.31）ng/mL,均明显高于 NC 组的（204.84±61.20）、（140.49±66.87）ng/mL（U=238.0000,Z=1.9607,P=0.0499;U=223.0000,Z=2.2226,P=0.0262）;晚期 EOC 患者 FCP、FLF 水平分别为（348.45±143.27）、（227.30±75.04）ng/mL,均明显高于早期 EOC 患者的（224.88±90.84）、（171.86±82.96）ng/mL（U=73.5000,Z=2.5520,P=0.0107;U=87.5000,Z=2.0844,P=0.0371）。EOC 患者 FCP、FLF 水平与其FIGO 分期均呈正相关关系（r=0.3792,P=0.0246;r=0.3462,P=0.0416）。EOC患者粪便中FCP、FLF水平与血清CA125水平均呈正相关关系（r=0.3856,P=0.0222;r=0.4605,P=0.0054）。EOC 患者粪便中 FCP、FLF 水平与 GSRS 评分均呈明显正相关关系（r=0.4471,P=0.0071;r=0.5096,P=0.0018）。FCP 用于EOC诊断的ROC曲线下面积为0.66,取截断值为267.30 ng/mL时,敏感性为42.86%,特异性为90.00%。FLF用于EOC诊断的ROC曲线下面积为0.68,取截断值为98.00 ng/mL时,敏感性为91.43%,特异性为45.00%。4.EOC患者肠道通透性相关指标检测结果免疫组织化学染色结果显示:EOC组患者结肠黏膜组织中OCLN、ZO-1相对表达量分别为18.06±2.34、25.70±1.35,均明显低于NC组的24.35±2.54、27.76±1.71（U=1.0000,Z=3.2557,P=0.0011;U=10.0000,Z=2.3105,P-=0.0209）。免疫荧光染色结果显示:NC组结肠黏膜组织紧密连接蛋白OCLN、ZO-1无明显异常分布;EOC组结肠黏膜组织中OCLN、ZO-1均出现异常分布,失去其特征性网状结构,变为不规则连接。ELISA结果显示:EOC组粪便中FAAT、FZ水平分别为（711.11±323.78）、（2.02±0.61）ng/mL,均明显高于对照组的（503.02± 317.00）、（1.60± 0.58）ng/mL,（U=227.5000,Z=2.1438,P=0.0321;U=237.0000,Z=1.9777,P=0.0480）;晚期 EOC 患者粪便中 FAAT、FZ 水平分别为（828.53±220.46）、（2.27±0.54）ng/mL,均明显高于早期 EOC 患者的（630.54±368.57）、（1.83±0.61）ng/mL（U=80.0000,Z=2.3348,P=0.0196;U=84.5000,Z=2.1841,P=0.0290）。EOC患者粪便中FAAT、FZ水平与其FIGO分期呈正相关关系（r=0.4460,P=0.0073;r=0.3982,P=0.0178）。EOC 患者粪便中 FAAT、FZ 水平与血清 CA125 水平均呈正相关关系（r=0.3385,P=0.0467;r=0.4077,P=0.0150）。EOC患者粪便中FZ水平与GSRS评分呈明显正相关关系（r=0.3696,P=0.0289）。EOC患者粪便中FAAT水平与IBS-SSS评分呈明显正相关关系（r=0.6206,P=0.0001）。FAAT用于EOC诊断的ROC曲线下面积为0.68,取截断值为714.00 ng/mL时,敏感性为51.43%,特异性为80.00%。FZ用于EOC诊断的ROC曲线下面积为0.66,取截断值为1.78 ng/mL时,敏感性为68.57%,特异性为65.00%。结论1.胃肠道功能障碍是EOC患者的早期临床表现之一,且症状随着EOC的疾病进展逐渐加重。2.EOC患者存在肠道炎症反应,且肠道通透性增高;随着EOC的疾病进展,肠道炎症逐渐加重、肠道通透性逐渐增高。3.FCP、FLF、FAAT、FZ等粪便标志物检测在卵巢癌筛查、诊断、预后评估中具有潜在的应用价值。