研究背景急性胃黏膜损伤(acute gastric mucosal lesion,AGML)是临床常见的并发症,病死率高。它的发病及修复过程受多因素、多途径调控,尚不完全明确,继续探索AGML的危险因素,寻求能够干预其进程的靶点具有重要的意义。过度、持续性伤害应激是诱发AGML的最重要因素。困难、复杂手术是并发AGML的常见应激源;中小手术未列为AGML的高危因素及可增加AGML并发出血的危险因素。然而,临床上,实施中小手术也可明显增加高危人群AGML的发病率并加重病情。因此,我们拟通过动物实验,明确中小手术创伤及术后疼痛是否作为伤害性应激,可加重AGML的损伤程度、延缓修复。近年来,分布于胃组织的瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)和酸离子敏感通道3(acid-sensing ion channel 3,ASIC3)作为伤害性感受器对局部应激的调控作用日益受到重视。位于胃黏膜细胞上的TRPV1,可通过调节黏膜血流量、胃酸分泌、胃动力等因素对黏膜防御机制发生影响;TRPV1参与调控血管内皮细胞、角膜上皮细胞和心肌细胞等一些胃外组织损伤后修复过程。ASIC3在消化道中的分布和功能研究尚处于起步阶段,少量研究显示在食管、结肠、胃组织均表达或可诱导表达ASIC3,在消化道信息处理过程中有重要作用。本课题组已证实TRPV1/ASIC3参与AGML的发生和调控,我们拟在此基础上进一步研究其在胃黏膜损伤后修复过程中的表达及作用。此外,TRPV1/ASIC3更大量分布于躯体感觉神经系统,在术后急性痛敏发生过程中发挥重要的作用。本课题组已发现舒芬太尼预先给药可激活AGML大鼠胃黏膜TRPV1,对胃黏膜起保护作用,ASIC3拮抗剂预处理可减轻胃黏膜损伤。由此我们推测,中小手术创伤及疼痛可能会改变胃黏膜细胞中TRPV1/ASIC3的活性,调控胃黏膜损伤及修复的过程。研究目的通过动物实验,初步探索:1、急性胃黏膜损伤后修复过程中TRPV1/ASIC3的表达及意义;2、SMIR术对浸水应激大鼠胃黏膜损伤后修复及TRPV1/ASIC3表达的影响,进一步探讨TRPV1/ASIC3在其中所发挥的作用及机制。旨在提高对TRPV1/ASIC3在胃黏膜损伤、修复病理生理过程中的认识,为围手术期控制应激、防治AGML提供新思路。实验方法1、第一部分:50只Wistar大鼠,随机分为正常对照组(NC组)、浸水束缚应激(water immersion restraint stress,WIRS)模型组(WIRS组)、应激后2h组(W2h组)、1天组(W1d组)、3天组(W3d组),各10只。观察检测指标:(1)一般情况,体温;(2)胃黏膜损伤愈合情况,评定UI值;(3)胃组织含水量;(4)胃液PH值;(5)血清SOD、MDA,计算SOD/MDA值;(6)胃组织HE染色;(7)免疫组化法检测TRPV1、ASIC3通道在胃组织定位及表达;(8)Q-PCR法检测胃黏膜TRPV1m RNA、ASIC3m RNA相对表达量。2、第二部分:56只Wistar大鼠,随机分为正常对照组(NC组)和实验组,实验组分为WIRS组及WIRS后SMIR术组,WIRS组又分为应激后2小时组(W2h组)、1天组(W1d组)、3天组(W3d组),WS组同理分为WS2h组、WS1d组、WS3d组,各8只。观察检测指标:不监测体温,余同第一部分。实验结果1、第一部分:应激后,胃黏膜损伤明显。WIRS、W2h组肛温明显低于正常(P<0.05),1天后恢复正常。与NC组相比,WIRS组UI升高;W2h组与WIRS组无统计差异,高于NC组(P<0.05);W1d组高于NC组(P<0.05),低于WIRS、W2h组(P<0.05);W3d组与NC组无统计学差异,低于WIRS、W2h、W1d组(P<0.05)。组织含水量在WIRS、W2h、W1d、W3d组均较NC组升高,以WIRS、W2h组最高,两组间无统计差异;W1d组较该两组下降(P<0.05);W3d组与W1d组无统计差异。与NC组比较,WIRS、W2h组胃液p H明显降低(P<0.05);W1d、W3d组上升,且高于W2h、WIRS及NC组(P<0.05),两组间无统计差异。相较于NC组,WIRS、W2h组血清SOD、MDA、SOD/MDA均升高(P<0.05);W1d、W3d组无统计学差异;与WIRS、W2h组相比,W1d组该三项指标均无统计学差异,W3d组SOD降低、SOD/MDA上升(P<0.05)而MDA无明显变化;与W1d组相比,W3d组SOD降低(P<0.05),余两项无统计学差异。WIRS、W2h组TRPV1较NC组相比减少(P<0.05),以损伤灶胃小凹周围细胞TRPV1表达减少最明显,两组间无统计差异;W1d组较该两组组继续降低(P<0.05);3d组升高至高于W1d、W2h、WIRS组(P<0.05),与NC组无统计学差异。WIRS、W2h组ASIC3较NC组增加(P<0.05),两组间无统计差异;W1d组较W2h、WIRS及NC组明显降低(P<0.05);W3d组上升,高于W1d组(P<0.05),但仍低于W2h、WIRS及NC组(P<0.05)。2、第二部分:WS组较WIRS组损伤加重、修复延迟。析因分析表明,UI、组织含水量、SOD/MDA、胃黏膜TRPV1和ASIC3分别在处理组组间、各时间点间、交互效应有统计差异(P<0.05);SOD和MDA只在各时间点间、交互效应有统计差异;胃液p H仅在交互效应有统计差异。SMIR组各指标随时间变化趋势与WIRS组一致。应激后2小时、1天及3天,WS组UI均高于WIRS组(P<0.05);WS组组织含水量在应激后2小时、1天高于WS组(P<0.05),3天后无差异;SOD/MDA应激后2小时,WS组显著低于WIRS组(P<0.05),1天后两组间无明显差异,3天后WS组高于WIRS组(P<0.05);TRPV1在WS组在应激后2小时、1天及3天均低于WIRS组(P<0.05);ASIC3在WS组在应激后2小时低于WIRS组,1天及3天均高于WIRS组(P<0.05)。TRPV1与UI、SOD/MDA相关,ASIC3与胃液p H高度正相关。实验结论1、胃黏膜急性损伤后修复过程中,TRPV1被抑制,3天后恢复;ASIC3呈短暂升高后显著降低再上升的变化过程,3天后未完全恢复。TRPV1/ASIC3可能参与调控胃黏膜损伤后修复过程。2、SMIR术加重AGML大鼠胃黏膜损伤程度、延缓修复;抑制胃黏膜TRPV1表达,TRPV1可能参与其对AGML大鼠胃黏膜进一步损伤、延迟修复的过程;损伤后早期不影响胃黏膜ASIC3表达,后期减轻WIRS对ASIC3的抑制作用。