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目的探讨去泛素化酶USP4介导的转录因子IRF8去泛素化对调节性T细胞功能的影响,进而为治疗调节性T细胞介导的免疫疾病、肿瘤提供理论依据以及药物靶点。材料和方法利用免疫共沉淀技术,在过表系统中,研究去泛素化酶USP4能否和转录因子IRF8相互作用。从人体外周单核细胞中分离原代调节性T细胞,进一步验证生理状态下USP4是否和IRF8结合。应用泛素化修饰实验,在过表系统中分析USP4对IRF8的泛素化修饰,同时在原代调节性T细胞内进行验证实验。利用基因沉默技术,敲低调节性T细胞USP4并检测IRF8的泛素修饰情况,同时检测细胞因子表达水平。运用体外共培养实验,分别在调节性T细胞内沉默USP4和应用USP4抑制剂,与效应T细胞共培养,检测调节性T细胞免疫抑制功能。查阅GSE数据,分析小鼠肠癌模型肠癌癌组织和癌旁调节性T细胞USP4和IRF8的表达量。利用免疫组化分析了人肠癌癌组织和癌旁组织免疫细胞USP4和IRF8的表达水平。结果过表系统中的免疫共沉淀实验表明,USP4能结合IRF8,而原代调节性T细胞内的免疫共沉淀结果与过表系统中一致,进一步证明了两者的相互作用。过表系统的泛素化分析显示,USP4通过K48位去泛素化修饰IRF8,从而稳定其蛋白表达,并且K48位的去泛素化修饰是酶活性依赖的。同时,该修饰也在原代调节性T细胞中得到验证。功能实验中,敲低USP4显著增加IRF8蛋白K48位的多聚泛素化,同时调节性T细胞Th2型细胞因子包括IL-4,IL-5,IL-13和IL-21表达增加。体外共培养实验结果显示,敲低USP4或者使用USP4抑制剂处理调节性T细胞都能抑制调节性T细胞的免疫抑制功能。GSE数据显示小鼠肠癌癌组织相对癌旁组织调节性T细胞USP4和IRF8表达都下降。人肠癌癌组织和癌旁组织相比,免疫细胞USP4和IRF8表达都降低。结论USP4能够与IRF8结合,作为去泛素化酶介导IRF8的K48位去泛素化修饰,并且稳定其蛋白水平,从而加强调节性T细胞免疫抑制功能。肠癌癌组织相比癌旁组织,免疫细胞USP4和IRF8都降低。