中间锦鸡儿CiMYBJ2基因的克隆及表达分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:xiaowangjianfeng
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植物在生长发育过程中不可避免地会遭受到各种逆境胁迫,包括干旱、高盐、低温和病虫害的侵袭等。锦鸡儿属(Caragana)植物属于豆科,主要分布在我国干旱半干旱地区。其中,中间锦鸡儿(Caragana intermedia)具有抗旱、抗寒、耐瘠薄、繁殖性强等特点,在改良土壤和保持水土等方面具有重要的生态价值。MYB转录因子是植物体内最大的转录因子家族之一,参与植物生长发育的调控、对逆境的响应等生理过程。本研究对一个R2R3-MYB类转录因子CiMYBJ2进行了基因克隆、结构鉴定、表达及其相关功能分析,主要结果如下:  1、从中间锦鸡儿转录组数据库中找到了一条编码R2R3-MYB的中间片段,通过RACE技术从克隆了该转录因子CiMYBJ2(GenBank登录号:KJ937783),其cDNA全长1368 bp,5UTR长203 bp,3UTR长196 bp。其中开放阅读框长969 bp,编码一个含322个氨基酸的亲水蛋白。gDNA序列长1285 bp,有3个外显子和2个内含子。  2、采用实时荧光定量PCR技术分析了CiMYBJ2的表达模式,结果发现,在高温、脱水、NaCl、干旱等处理条件下,CiMYBJ2基因对这些胁迫均有响应。表明CiMYBJ2基因可能在植物对胁迫的响应过程中起作用。  3、利用染色体步移技术克隆了中间锦鸡儿CiMYBJ2基因873 bp的启动子序列。分析显示,该启动子具有响应多种非生物胁迫的顺式作用元件。构建了 CiMYBJ2基因启动子驱动 GUS基因的表达载体并转化了野生型拟南芥,对不同组织部位进行GUS染色发现,CiMYBJ2基因在叶片的表皮毛、根和花中有特异性的表达。  4、构建了CaMV35S启动子驱动CiMYBJ2编码区的过表达载体,并转化了野生型拟南芥,荧光定量 PCR检测发现各转基因植物纯合体株系中目的基因都有不同程度的表达。  5、构建了CaMV35S启动子驱动CiMYBJ2全长cDNA与GFP的融合表达载体并转化了野生型拟南芥,没有观察到核定位,CiMYBJ2-GFP融合蛋白在转录水平有表达,但是Western blot结果显示融合蛋白没有表达,推测可能是由于蛋白降解导致没有核定位。
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